1. Repositório Institucional - Universidade Federal de Uberlândia
2. Instituto de Biotecnologia (IBTEC)
3. TCC - Biotecnologia (Uberlândia)

ORCID:	http://orcid.org/0000-0002-0219-8394
Document type:	Trabalho de Conclusão de Curso
Access type:	Acesso Aberto Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 United States
Title:	Clonagem e expressão da enzima Bhalternina da peçonha de serpente Bothrops alternatus em sistema bacteriano
Alternate title (s):	Cloning and expression of enzyme Bhalternin of the snake venom Bothrops alternatus in bacterial system
Author:	Tiago, Rhaysa Mateus
First Advisor:	Yokosawa, Jonny
First member of the Committee:	Polli, Mayara Garcia
Second member of the Committee:	Mamede, Carla Cristine Neves
Summary:	As serinoproteases são enzimas da peçonha capazes de esgotar o fibrinogênio circulante na presa por meio da quebra dessa molécula. A fibrina formada a partir dessa quebra é frágil e não promove a agregação plaquetária, tornando o sangue do indivíduo incoagulável. Há alguns anos foi descrita uma serinoprotease isolada a partir de peçonha de serpente da espécie Bothrops alternatus, denominada de Bhalternina, que apresentou atividade fibrinogenolítica. Enzimas que apresentam esse tipo de atividade, funcionam como agentes anticoagulantes e, por isso, possuem o potencial de serem aplicadas na terapia e prevenção de desordens trombóticas. Sendo assim, através da engenharia genética, o objetivo do trabalho foi realizar clonagem e expressão da enzima Bhalternina da peçonha de serpente Bothrops alternatus em sistema bacteriano. A sequência codificante desta proteína foi ligada ao vetor pGS-21a, e a reação de ligação foi utilizada na transformação de células competentes TOP10 por eletroporação. Após o cultivo, algumas colônias foram selecionadas para obtenção do DNA plasmidial e análise do perfil eletroforético. A colônia selecionada teve o DNA plasmidial purificado, que foi utilizado para confirmação da sequência codificante da Bhalternina e na transformação da bactéria Escherichia coli cepa BL21 codon plus (DE3) RIPL por eletroporação. Algumas colônias foram selecionadas e submetidas ao experimento de expressão da Bhalternina por indução com IPTG e a análise de sua expressão foi avaliada por eletroforese. Os resultados mostraram que uma proteína de massa molecular de 56,4 kDa, valor estimado da massa molecular da Bhalternina fundida à glutationa S-transferase, foi expressa pelos clones.
Keywords:	Peçonha Bhalternina Expressão em bactérias Proteína recombinante Desordens trombóticas
Area (s) of CNPq:	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR
Language:	por
Country:	Brasil
Publisher:	Universidade Federal de Uberlândia
Quote:	TIAGO, Rhaysa Mateus. Clonagem e expressão da enzima Bhalternina da peçonha de serpente Bothrops alternatus em sistema bacteriano. 2019. 28 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Biotecnologia) – Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2019.
URI:	https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/26194
Date of defense:	7-Mar-2019
Appears in Collections:	TCC - Biotecnologia (Uberlândia)

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