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Document type: Dissertação
Access type: Acesso Aberto
Title: Anticorpos IgY anti-larvas de Ancylostoma ceylanicum aplicados no imunodiagnóstico da ancilostomíase humana e reatividade cruzada com a estrongiloidíase
Alternate title (s): Antibodies IgY anti-larvae of Ancylostoma ceylanicum applied in immunodiagnosis of human hookworm and cross-reactivity with strongyloidiasis
Author: Souza, Dayane Costa de
First Advisor: Costa-cruz, Julia Maria
First member of the Committee: Ferreira Júnior, Álvaro
Second member of the Committee: Gonzaga, Henrique Tomaz
Summary: A ancilostomíase é considerada uma doença parasitária negligenciada causada por helmintos nematódeos pertencentes à família Ancylostomatidae. Aproximadamente 740 milhões de pessoas, no mundo, estão infectadas por este parasito. As dificuldades no diagnóstico desta parasitose podem estar relacionadas à reatividade cruzada com outros parasitos, atribuída à complexidade antigênica e proximidade filogenética. Com a finalidade de melhorar o diagnóstico da ancilostomíase humana, este estudo viabilizou a produção inédita de anticorpos IgY específicos ao Ancylostoma ceylanicum, destacando o fato do método ser economicamente viável, de fácil reprodução e com alto grau de rentabilidade de anticorpos. O extrato salino total de larvas filarioides de A. ceylanicum foi avaliado em eletroforese unidimensional em gel de poliacrilamida 8% (SDS-PAGE) para caracterização do perfil proteico e posterior utilização na imunização das galinhas. As amostras purificadas de anticorpos IgY anti-larvas de A. ceylanicum apresentaram concentrações entre 8.370 μg/mL e 4.000 μg/mL. A gema pura apresentou bandas proteicas com peso de ≤ 200, 110, 80, 50 e 20 kDa. As frações P1, P2 e a amostra purificada no HPLC demonstraram bandas com pesos moleculares um pouco abaixo de ≤ 200 kDa, identificando a IgY específica. Os picos da produção de anticorpos IgY anti-larvas de A. ceylanicum ocorreram na 6a, 8a e 16a semanas após imunização. A maior avidez foi detectada na 15ª semana com índice avidez de 67%. Os anticorpos foram capazes de detectar imunocomplexo em 16,6% (5/30) das amostras de soro de indivíduos com ancilostomíase. Em relação a reatividade cruzada entre os parasitos: 10% (3/30) das amostras de soro de indivíduos com estrongiloidíase, 6,7% (2/30) em amostras de soro com outras parasitoses e 0% nos casos negativos. Concluiu-se que o anticorpo IgY anti-larvas de A. ceylanicum pode ser considerado uma possível ferramenta diagnóstica para a ancilostomíase, porém, mais estudos são necessários para o aprimoramento das técnicas.
Abstract: The hookworm infection is considered a neglected tropical disease (NTD) caused by nematodes belonging to Ancylostomatidae family. Approximately 740 million people worldwide are infected with this parasite. Difficulties in the diagnosis may be related to cross-reactivity with other parasites, due to the antigenic complexity and phylogenetic proximity to some species. In order to improve the diagnosis of human hookworm infection, this study enabled the unprecedented production of specific IgY antibodies against Ancylostoma ceylanicum, highlighting the fact that the method is economically feasible, reproducible and has high antibodies profitability. The saline extract of A. ceylanicum filarial larvae was evaluated in one-dimensional electrophoresis to characterize the protein profile and chickens immunization. Samples of purified anti-larvae of A. ceylanicum IgY showed concentrations of 8.370 μg/ml and 4.000 μg/ml. The process of IgY antibodies purification was confirmed by polyacrylamide gel electrophoresis 8% (SDS-PAGE). The pure yolks showed protein bands with apparent molecular weight slightly below ≤ 200, 110, 80, 50 and 20 kDa. The fractions P1 and P2, and the HPLC purified sample showed bands with molecular weights somewhat below ≤ 200 kDa, identifying the specific IgY. The peaks of the production of A. ceylanicum antibodies IgY anti-larvae occurred at 6th, 8th and 16th weeks after the immunizations. The higher avidity was detected at 15th week with 67% content. The antibodies were capable of detecting immunocomplexes in 16.6% (5/30) of serum samples from infected individuals with hookworm, 10% (3/30) of serum samples from individuals with strongyloidiasis, 6.7% (2/30) in serum samples with other parasitosis and 0% in negative cases. It is concluded that the A. ceylanicum IgY antibody anti-larvae can be considered as a possible diagnostic tool for hookworm infection, but more studies are needed to improve the techniques.
Keywords: Imunologia
Ancilostomíase
Doenças parasitárias
Antígenos
Antígeno heterólogo
Cromatografia
Fracionamento
Imunização
Heterologous antigen
Chromatography
Fractionation
Immunization
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Program: Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
Quote: SOUZA, Dayane Costa de. Anticorpos IgY anti-larvas de Ancylostoma ceylanicum aplicados no imunodiagnóstico da ancilostomíase humana e reatividade cruzada com a estrongiloidíase. 2016. 67 f. Dissertação (Mestrado em Imunologia e Parasitologia Aplicadas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2016.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/17852
Date of defense: 14-Jul-2016
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