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metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Isolamento, cultivo e caracterização de células derivadas de cardioesferas de camundongos CD1
Other Titles: Isolation, culture and characterization of cardiospheres-derived cells from CD1 mice
metadata.dc.creator: Alves, Poliana Rodrigues
metadata.dc.contributor.advisor1: Resende, Elmiro Santos
metadata.dc.contributor.advisor-co1: Carvalho, Adriana Bastos
metadata.dc.contributor.referee1: Beletti, Marcelo Emílio
metadata.dc.contributor.referee2: Mineo, Jose Roberto
metadata.dc.contributor.referee3: Oliveira, Patrícia Fidelis de
metadata.dc.description.resumo: No Brasil, como em todo o mundo, as doenças cardiovasculares têm sido uma das principais causas de morte. A alta mortalidade e as poucas alternativas terapêuticas para estas doenças têm estimulado a investigação no campo das células estaminais. Recentemente, alguns grupos têm mostrado a presença de células-tronco/progenitoras residentes no coração. Estas poderiam ser cultivadas diretamente a partir de tecidos cardíacos produzindo aglomerados esféricos denominados Cardioesferas as quais, contém células proliferativas que dão origem, após o plaqueamento, a uma população heterogênea denominada: células derivadas de cardioesferas (CDCs). O objetivo deste estudo foi isolar, cultivar e caracterizar as CDCs de camundongos da linhagem CD1. Para isto, as células primárias foram isoladas a partir de corações de camundongos adultos da linhagem CD1 após a digestão de pequenos fragmentos do órgão em colagenase tipo II 420U/ml por 20 minutos a 37°C. Nas análises por citometria de fluxo (FACS) foram observadas baixa expressão das moléculas de CD19 (0,4%), CD45 (0,5%) e CD90 (4,7%), e alta expressão das moléculas CD73 (71,4%), CD105 (25,1%), CD14 (25,1%). Nos ensaios de imunofluorescência foi possível observar a expressão das proteínas no citoplasma dos cardiomiócitos: vimentina, desmina e alfa actina de músculo liso, além da expressão do filamento intermediário nestina. Ao analisar a expansão celular por population doubling time foi observado que as CDCs duplicaram sua população original em cerca de 1,8 dias. Estes resultados sugerem que as CDCs isoladas a partir de camundongos da linhagem CD1, são células que apresentam características de células mesenquimais, constituindo uma população celular a ser testada nos estudos em terapias celulares. Estes resultados motivam o estabelecimento de protocolos que visem investigar possíveis efeitos parácrinos benéficos, bem como o potencial angiogênico e cardiogênico destas células.
Abstract: In Brazil, as in the world, cardiovascular diseases have been a major cause of death. The high mortality and few therapeutic alternatives for this disease have stimulated research on the stem cell field. Recently some groups have shown the presence of resident stem cells in the heart that can generate new cardiomyocytes. However, the cardiac stem cells exist in small amounts in vivo and their isolation and ex vivo expansion is a challenge for clinical use. In this study, our goal was to isolate, characterize and grow cardiosphere-derived cells from CD1 mice. Surface molecules present in these cells were analyzed by flow cytometry and expression of cytoplasmic proteins was analyzed by immunofluorescence. Primary cells were isolated from the hearts of adult mice after digestion of the organ into small pieces using 420U/ml of collagenase II in four cycles of 5 minutes at 37°C. Subsequently, cells were maintained in culture in an incubator at 37°C and 5% CO2 for approximately 3 weeks. The immunofluorescence assays and flow cytometry were performed between passages 3 and 5 which 0.25% trypsin was used. The cells expressed the following proteins in their cytoplasm: vimentin, desmin, nestin and α-smooth muscle actin and population doubling time was 1.8 days. Additionally, flow cytometry showed low expression of the molecules CD19 (0.4), CD45 (0.5) and CD90 (4.77), and higher expression of CD73 (71.47), CD105 (25.1), CD14 (25.17). These results suggest that the CDC isolated from CD1 mice are cells with a mesenchymal phenotype, but their beneficial potential in cardiac repair remains to be tested.
Keywords: Células derivadas de cardioesferas
Células tronco cardíacas
Caracterização
CDCs
Cardiac stem cells
Characterization
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências da Saúde
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde
Citation: ALVES, Poliana Rodrigues. Isolation, culture and characterization of cardiospheres-derived cells from CD1 mice. 2013. 48 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2013.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/12764
Issue Date: 28-Feb-2013
Appears in Collections:PGCS - Mestrado em Ciências da Saúde

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