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ORCID:  http://orcid.org/0009-0006-9929-6324
Document type: Dissertação
Access type: Acesso Embargado
Embargo Date: 2026-03-01
Title: Perfil de expressão de citoqueratina 17 e anexina A2 em modelo celular da doença hepática gordurosa associada ao metabolismo
Alternate title (s): Expression profile of cytokeratin 17 and annexin A2 in a cellular model of metabolic-associated fatty liver disease
Author: Azevedo, Gabriela Tolentino
First Advisor: Araújo, Thaise Gonçalves de
First coorientator: Guerra, Joyce Ferreira da Costa
First member of the Committee: Fürstenau, Cristina Ribas
Second member of the Committee: Ávila, Veridiana de Melo Rodrigues
Summary: A obesidade e a doença Hepática Gordurosa Associada ao Metabolismo (MAFLD) têm aumentado entre a população nos últimos anos, tornando-se um problema de saúde pública, incluindo no Brasil. O acúmulo excessivo de gordura corporal é um fator de risco para síndromes metabólicas, o que determina uma íntima relação entre as duas condições. Contudo, o perfil molecular da obesidade e MAFLD ainda é pouco conhecido e se mostra essencial para a compreensão de sua gênese e direcionamento terapêutico. Assim, o presente estudo objetivou avaliar o perfil de expressão de dois novos marcadores Citoqueratina 17 (KRT17) e Anexina A2 (ANXA2) em modelo celular de MAFLD. Para isso, o acúmulo de lipídios foi induzido expondo células HepG2 à palmitato isolado a 0,7 mM (P), à mistura de ácidos oleico e palmítico a 2:1, sendo definido como OP1 na concentração final de 1 mM e OP2 na concentração final de 2 mM. Os lipídios foram conjugados com albumina sérica bovina (BSA) e mantidos por 24 h. Como controle, as células foram incubadas com veículo (DMEM conjugado com BSA contendo etanol). O acúmulo de lipídios foi avaliado colorimetricamente utilizando Oil Red. Ensaios de qRT-PCR e Western Blotting foram conduzidos para observar a modulação transcricional de KRT17, ANXA2 e das citocinas IL1β, IL17, IL22, TGFβ, IL6 e STAT3. Os resultados revelaram que houve acúmulo intracelular de lipídios em todos os tratamentos. Em OP2, a expressão de ANXA2 aumentou significativamente. Os transcritos de IL-1β, IL-17, IL-22, TGF-β, IL-6 e STAT3, também se mostraram significativamente aumentados apenas no grupo OP2, o que evidencia um processo inflamatório associado à MAFLD quando os ácidos oleico e palmítico são adicionados na concentração de 2 mM. Em nível proteico, houve uma maior expressão citoplasmática de ANXA2 em OP1 e OP2, sem diferença significante no núcleo. Já os níveis de KRT17 foram reduzidos no citoplasma dos tratamentos OP1 e OP2. Portanto, em condições de esteatose por acúmulo de lipídios em células HepG2, ocorre um processo inflamatório acompanhado pelo aumento dos transcritos de KRT17 e ANXA2 e um comportamento proteico diferencial, com aumento de ANXA2 no citoplasma e diminuição de KRT17, que pode se translocar para o núcleo. Logo, o eixo citocinas-KRT17/ANXA2 pode ser um alvo promissor na compreensão de distúrbios metabólicos, especialmente MAFLD.
Abstract: Obesity and metabolic-associated fatty liver disease (MAFLD) have increased, becoming a public health problem, including in Brazil. Excessive accumulation of body fat is a risk factor for metabolic syndromes, demonstrating a close relationship between the two conditions. However, the molecular profile of obesity and MAFLD is still poorly known and is essential for understanding their genesis and therapeutic targeting. Thus, the present study aimed to evaluate the expression profile of two new markers Cytokeratin 17 (KRT17) and Annexin A2 (ANXA2) in a cellular model of MAFLD. For this, lipid accumulation was induced by exposing HepG2 cells to isolated palmitate at 0.7 mM (P), to oleic and palmitic fatty acids in a 2:1 ratio, defined as OP1 at a final concentration of 1 mM and OP2 at final concentration of 2 mM. The lipids were conjugated with bovine serum albumin (BSA) for 24 hours. As a control, cells were incubated with vehicle (BSA-conjugated DMEM containing ethanol). qRT-PCR and Western Blotting assays were conducted to observe the transcriptional modulation of KRT17 ANXA2 and the cytokines IL1β, IL17, IL22, TGFβ, IL6 and STAT3. The results revealed that there was intracellular accumulation of lipids in all treatments. In OP2, ANXA2 expression increased significantly. IL-1β, IL-17, IL-22, TGF-β, IL-6 and STAT3 transcripts were also significantly increased in the OP2 group, demonstrating an inflammatory process associated with MAFLD when fatty acids are added at the final concentration 2mM. There was an increase in the cytoplasmic protein expression of ANXA2 in OP1 and OP2, with no significant difference in the nucleus. The expression of KRT17 decreased significantly in the cytoplasm in OP1 and OP2 treatments. Thus, under conditions of steatosis due to lipid accumulation in HepG2 cells, an inflammatory process occurs accompanied by an increase in KRT17 and ANXA2 transcripts and a differential protein behavior, with an increase in ANXA2 in the cytoplasm and a decrease in KRT17, which can translocate to the nucleus Therefore, the cytokines-KRT17/ANXA2 axis may be a promising target in understanding metabolic disorders, especially MAFLD.
Keywords: Síndrome metabólica
Obesidade
MAFLD
Esteatose hepática
Células HepG2
Citoqueratina 17
Anexina A2
Metabolic syndrome
Obesity
MAFLD
Hepatic steatosis
HepG2 cells
KRT17
ANXA2
Biotecnologia
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Program: Programa de Pós-graduação em Biotecnologia
Quote: AZEVEDO, Gabriela Tolentino. Perfil de expressão da citoqueratina 17 e anexina A2 em modelo celular da doença hepática associada ao metabolismo. 2024. 78 p. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Programa de Pós-graduação em Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Patos de Minas, 2024. DOI http://doi.org/10.14393/ufu.di.2024.36
Document identifier: http://doi.org/10.14393/ufu.di.2024.36
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/41316
Date of defense: 26-Feb-2024
Sustainable Development Goals SDGs: ODS::ODS 3. Saúde e bem-estar - Assegurar uma vida saudável e promover o bem-estar para todos, em todas as idades.
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