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ORCID:  http://orcid.org/0000-0002-4085-6781
Document type: Tese
Access type: Acesso Embargado
Embargo Date: 2023-08-27
Title: Fatores que afetam a síntese de mediadores inflamatórios da resposta imune inata endometrial de bovinos
Alternate title (s): Factors affecting the synthesis of inflammatory mediators of the endometrial innate immune response of bovines
Author: Rezende, Amanda Lima
First Advisor: Saut, João Paulo Elsen
First coorientator: Alves, Kele Amaral
First member of the Committee: Santos, Ricarda Maria dos
Second member of the Committee: Silva, Elisa Sant'anna Monteiro da
Third member of the Committee: Macedo, Gustavo Guerino
Fourth member of the Committee: Fagundes, Nádia Simarro
Summary: A ocorrência de doenças uterinas no pós-parto de vacas leiteiras é elevada e impacta diretamente nos índices reprodutivos dos animais. Assim sendo, este trabalho teve como objetivo avaliar a expressão gênica de mediadores pró-inflamatórios aos 14 e 35 dias em lactação (DEL) no endométrio de vacas mestiças leiteiras com e sem endometrite subclínica (ES). Os animais foram avaliados semanalmente aos sete, 14, 28 e 35 DEL e realizados os exames físico e do sistema reprodutor. Aos 14 e 35 DEL foram coletadas amostras endometriais por meio de biópsia uterina. As amostras foram processadas e analisadas pela técnica de qRT-PCR, para avaliação da expressão gênica das citocinas pró-inflamatórias IL1β, IL6, IL8 e CCL5. Além disso, aos 35 DEL foram coletados swabs por meio da técnica de escova endometrial (cytobrush) para citologia endometrial e diagnóstico da ES. A expressão gênica da IL1β foi maior no grupo sem doença comparado ao grupo ES aos 14 DEL (p=0,0009). Houve diferença na expressão gênica da IL8 entre os grupos (p<0,001) aos 14 DEL e em relação ao momento de coleta (p = 0,0011), com maior expressão aos 14 DEL quando comparado aos 35 DEL. Não foram observadas diferenças na expressão gênica da IL6 e CCL5 entre os grupos com e sem ES e os momentos avaliados (14 x 35 DEL). Concluiu-se que as vacas mestiças leiteiras sem doenças uterinas pós-parto apresentam resposta imune mais robusta aos 14 DEL, com maior expressão das citocinas pró-inflamatórias IL1β e IL8 quando comparadas às vacas com ES, sendo a análise da expressão gênica destas citocinas uma ferramenta potencial para o diagnóstico precoce da ES. Além disso, tendo em vista que a kisspeptina é um neuropeptídeo conhecido por sua potente ação estimulatória do hormônio liberador de gonadotrofina (GNRH), responsável por regular centralmente a função ovariana e o ciclo estral. Além do seu papel fundamental na regulação do eixo reprodutivo, a kisspeptina é capaz de modular a função das células do sistema imune, com possível regulação na interação destes dois sistemas. O presente estudo também objetivou avaliar o papel modulatório da kisspeptina na resposta imune inata endometrial de fêmeas bovinas. Para tanto, foram realizados cinco experimentos e utilizado o total de 24 tratos reprodutivos de fêmeas bovinas nulíparas, coletados em abatedouro comercial, para processamento através da técnica de cultivo de endométrio ex vivo. Os tratamentos utilizados no cultivo dos explantes endometriais de regiões caruncular e intercaruncular consistiram de kisspeptina (Kp 10-5 M; Kp 10-6 M; Kp 10-7 M), antagonista p234 (p234 10-5 M; p234 10-7 M; p234 10-9 M), progesterona (5ng/mL) e dexametasona (5ng/mL), desafiados ou não com 1μg/mL lipopolissacarídeo (LPS), nos tempos de 12 e 24 horas de cultivo. Foram avaliadas a expressão gênica das citocinas IL6, IL1β e a concentração das citocinas IL6, IL1β e IL8, pelas técnicas de qRT-PCR e ELISA, respectivamente. Não houve diferença na expressão gênica das citocinas IL1β e IL6 e na produção de IL6, IL1β e IL8 em nenhum dos tratamentos realizados com diferentes concentrações de kisspeptina. Concluiu-se que a kisspeptina não apresentou efeito modulatório sobre a resposta imune inata do endométrio bovino quando se utilizou o modelo de cultivo endometrial ex vivo.
Abstract: Due to the high occurrence of uterine diseases in the postpartum period of dairy cows and directly impacting the reproductive indices of animals, this study also aimed to evaluate the gene expression of proinflammatory mediators in the endometrium of crossbred dairy cows with and without SE, at 14 and 35 days in milk (DIM). The physical and reproductive system evaluations of the animals were performed weekly at 7, 14, 28 and 35 DIM. At 14 and 35 DIM, endometrial samples were collected by uterine biopsy. The samples were analyzed by the qRT-PCR technique, to evaluate the gene expression of the pro-inflammatory cytokines IL1β, IL6, IL8 and CCL5. In addition, it was collected endometrial swabs using the endometrial brush technique (cytobrush) for endometrial cytology and diagnosis of SE. The IL1β gene expression to the group without SE was higher than the SE group at 14 DIM (p = 0.0009). There was a difference in the IL8 gene expression at 14 DIM between groups (p < 0.001) and in relation to the collection time, with greater expression at 14 DIM when compared to 35 DIM (p = 0.0011). There were no differences in the IL6 and CCL5 gene expression between cows with and without SE and the collection time. In conclusion, the crossbred dairy cows without uterine diseases have a more robust immune response at 14 DIM, with greater expression of the proinflammatory cytokines IL1β and IL8 when compared to the cows with SE, being the analysis of the gene expression of these cytokines a potential tool for the early diagnosis of SE. Besides that, in view of the kisspeptin is a neuropeptide known for its potent stimulatory action of the gonadotropin-releasing hormone (GNRH), responsible for centrally regulating ovarian function and the estrous cycle. In addition to its fundamental role in the regulation of the reproductive axis, kisspeptin is able to modulate the function of cells in the immune system, with possible regulation in the interaction of these two systems. The present study also aimed to evaluate the modulatory role of kisspeptin in the innate endometrial immune response of bovine females. Therefore, five experiments were carried out and a total of 24 reproductive tracts of nulliparous bovine females were used, collected in a commercial slaughterhouse, for processing through the ex vivo endometrium cultivation technique. The treatments used in the cultivation of endometrial explants from caruncular and intercaruncular regions consisted of kisspeptin (Kp 10-5 M; Kp 10-6 M; Kp 10-7 M), antagonist p234 (p234 10-5 M; p234 10-7 M; p234 10-9 M), progesterone (5ng/mL) and dexamethasone (5ng/mL), challenged or not with 1μg/mL lipopolysaccharide (LPS), at 12 and 24 hours of culture. Gene expression of cytokines IL6, IL1β and concentration of cytokines IL6, IL1β and IL8 were evaluated by qRT-PCR and ELISA, respectively. There was no difference in the gene expression of IL1β and IL6 cytokines and in the production of IL6, IL1β and IL8 in any of the treatments performed with different concentrations of kisspeptin. It was concluded that kisspeptin had no modulatory effect on the innate immune response of the bovine endometrium when the ex vivo endometrial culture model was used.
Keywords: citocinas
endométrio
interleucina 6
interleucina 1β
interleucina 8
neuropeptídeo
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA::REPRODUCAO ANIMAL::FISIOPATOLOGIA DA REPRODUCAO ANIMAL
Subject: Veterinária
Endométrio
Bovinos de leite
Expressão gênica
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Program: Programa de Pós-graduação em Ciências Veterinárias
Quote: REZENDE, Amanda Lima. Fatores que afetam a síntese de mediadores inflamatórios da resposta imune inata endometrial de bovinos. 2021. 94 f. Tese (Doutorado em Ciências Veterinárias) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2021. DOI http://doi.org/10.14393/ufu.te.2021.487.
Document identifier: http://doi.org/10.14393/ufu.te.2021.487
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/33241
Date of defense: 27-Aug-2021
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