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https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/26795
Document type: | Dissertação |
Access type: | Acesso Aberto Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 United States |
Title: | Purificação e Caracterização Química Parciais de uma enzima proteolítica do veneno de Bothrops moojeni (Caissaca) |
Alternate title (s): | Purification and Partial Chemical Characterization of a Proteolytic Enzyme from Bothrops moojeni (Caissaca) Poison |
Author: | Oliveira, Fábio de |
First Advisor: | Brandeburgo, Maria Inês Homsi |
First member of the Committee: | Hamaguchi, Amélia |
Second member of the Committee: | Vilela, Suely |
Third member of the Committee: | Siqueira, Egle Machado de Almeida |
Summary: | A ação proteolítica das proteinases do veneno de serpentes têm sido determinada em um grande número de substratos sintéticos e naturais. Uma serino proteinase básica, ativa sobre a caseína e fibrinogênio foi purificada a partir do veneno de Bothrops moojeni usando um simples passo de cromatografia em coluna de CM Sepharose fast flow equilibrada com tampão Tris-HCl 0,05 M pH 7,0 em KC1 0,1 M e eluída com gradiente convexo de concentração ( 0,1 M - 0,45 M KCI) do mesmo tampão. A enzima , denominada M003, não é hemorrágica e apresenta somente traços de atividade coagulante. Substratos sintéticos ou cromogênicos (DL-BAPNA azocaseína e azoalbumina) não são hidrolisados pela M 003. Em gel de eletroforese em poliacrilamida pH 4,3, M 003 apresentou uma banda única Em eletroforese em gel de poliacrilamida com agentes desnaturantes, M 003 se comportou como uma proteína de cadeia simples com um peso molecular aparente de 26.600, na presença e ausência de p-mercaptoetanol. A enzima não contem carboidratos neutros, seu aminoácido N-terminal é a alanina e tem pi 7.8. A composição em aminoácidos mostrou 249 resíduos/mol, um alto conteúdo de aminoácidos hidrofílicos e 14 resíduos de meia-cistina, os quais possibilitam até 7 pontes de dissulfetos. A proteinase cliva a cadeia a mais rapidamente que a cadeia (3 do fibrinogênio bovino e não mostrou nenhum efeito sobre a cadeia 8. As atividades coagulante e proteolítica foram inibidas quando M 003 foi tratada com EDTA, P-mercaptoetanol e leupeptina. A atividade esterolítica de M 003 sobre -N-tosyl-Arginina metil éster (TAME) é de 29,66 pMol min'1 mg'1. A recuperação total em absorbância foi de aproximadamente 66 %, com M003 representando 1,42 % (p/p) do veneno bruto inicial. |
Abstract: | Proteolytic action of snake venom proteinases has been determined on a great number of natural and synthetic substrates. A basic serine proteinase active on casein and fibrinogen was purifíed from Bothrops moojeni venom using only one step by chromatography on CM Sepharose fast flow column previously equilibrated with 0.05 M, pH 7.0 Tris-HCl 0.1 M KC1 and eluted with a convex concentration gradient (0.1 M - 0.45 M KC1) of the same buffer. The enzyme, named M003, is not hemorrhagic and presents only traces of blood- clotting activity. Synthetic chromogenic substrates (azoacasein and azoalbumin) where not hydrolyzed by M 003. On polyacrylamide gel electrophoresis at pH 4.3, M 003 presented a single protein band. On sodium dodecyl sulfate-polyaciylamide electrophoresis M 003 behave as a single- chain protein with a mol. wts of 26,600 in the presence and absence of P- mercaptoethanol and pi 7.8. The enzyme does not contain neutra) carbohydrates and its N-terminal amino acid is alanine. The amino acid composition showed 249 residues/moles a high contents hydrophilic amino acids and 14 half-cys residues, which should account for 7 dissulfide bonds. The proteinase cleaves the A-a chain faster than the B-p of bovine fibrinogen and shows no effect on the 8-chain. Both coagulant and proteolytic activities where inhibited when the M003 was treated with EDTA, P-mercaptoethanol and leupeptin. Specific esterolytic activities of M 003 on alfa-N-tosyl-1- arginine methyl ester (TAME) are 29.64 pmol min-1 mg-1. Total absorbance recovery for column was around 66%. M 003 represented 1.42% (w/w) of the initial desiccated venom |
Keywords: | Venom Veneno Cobra Snake |
Area (s) of CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA |
Language: | por |
Country: | Brasil |
Publisher: | Universidade Federal de Uberlândia |
Program: | Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica |
Quote: | OLIVEIRA, Fábio de. Purificação e Caracterização Química Parciais de uma enzima proteolítica do veneno de Bothrops moojeni (Caissaca). 1997. 144 f. Dissertação (Mestrado em Genética e Bioquímica) – Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2019. DOI http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.1997.11 |
Document identifier: | http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.1997.11 |
URI: | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/26795 |
Date of defense: | 26-May-1997 |
Appears in Collections: | DISSERTAÇÃO - Genética e Bioquímica |
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