Extração de DNA de plantas do Cerrado: metodologia inédita e eficiente

Souza, Diego Cerveira de

Please use this identifier to cite or link to this item: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/24776

Document type:	Dissertação
Access type:	Acesso Aberto
Title:	Extração de DNA de plantas do Cerrado: metodologia inédita e eficiente
Alternate title (s):	DNA extraction of Cerrado plants: new and efficient methodology
Author:	Souza, Diego Cerveira de
First Advisor:	Teixeira, Terezinha Aparecida
First member of the Committee:	Resende, Daiane Silva
Second member of the Committee:	Duarte, Gilvan Caetano
Summary:	O Cerrado é a savana mais rica do planeta em biodiversidade, sendo considerado um dos 35 hotspots mundiais, ou seja, áreas prioritárias para conservação pela alta taxa de degradação e número de espécies endêmicas. Diversas espécies do bioma também possuem potencial para aproveitamento econômico, para fins alimentícios, madeireiros, ornamentais e medicinais. Porém, as plantas do Cerrado são geralmente ricas em metabólitos secundários, especialmente compostos fenólicos, os quais dificultam a extração de DNA em quantidade e qualidade suficiente para análises moleculares, essenciais para programas de conservação ou melhoramento. Os métodos de extração descritos até hoje muitas vezes não se adequam às características destas espécies e/ou são demorados, caros e utilizam reagentes tóxicos. Neste contexto, o presente trabalho objetivou o desenvolvimento de um novo e eficiente método para extração de DNA de plantas do Cerrado, de maneira mais rápida, barata e segura, bem como a comparação do tempo e custos envolvidos no protocolo aqui descrito e naqueles já testados para espécies vegetais do bioma. Nosso método, baseado no uso conjunto de SDS e Triton X-100, dispensa a necessidade de múltiplas etapas de purificação e reduz o uso de reagentes caros e/ou tóxicos. Para os testes, foram selecionadas 10 espécies representativas do bioma Cerrado. A qualidade e quantidade do DNA extraído foram analisadas por espectrofotômetro e em gel de agarose e a sua adequabilidade para estudos moleculares avaliada através de digestão com enzima de restrição e amplificação via PCR com marcador RAPD. O DNA obtido pelo nosso método apresentou-se íntegro, livre de contaminantes e excelente para digestão e amplificação via PCR. A concentração média do DNA entre as espécies testadas variou de 156 a 1166 ng.µL-1 e a relação A260/A280 de 1,78 a 1,92. O nosso protocolo também se mostrou mais rápido e barato, quando comparado com os métodos de extração de DNA já testados para espécies do bioma. Portanto, o protocolo apresentado aqui será uma importante ferramenta para análises moleculares de espécies do Cerrado.
Abstract:	The biome Cerrado is the richest savanna in the world in biodiversity, being considered one of the 35 hotspots worldwide, which are priority areas for conservation by the high rate of degradation and number of endemic species. Several species of the biome also have potential for economic use, for food, wood, ornamental and medicinal purposes. However, Cerrado plants are generally rich in secondary compounds, especially phenolic compounds, which make it difficult to extract DNA in sufficient quantity and quality for molecular analyzes, essential for conservation or breeding programs. The extraction methods described to date often do not fit the characteristics of these species and/or are time consuming, expensive and use toxic reagents. So, the present study aims to develop a new and efficient method for extracting DNA from Cerrado plants, in a faster, cheaper and safer way, as well as the comparison of the time and costs involved in the protocol described here and in those already tested for Cerrado plant species. Our method, based on the combined use of SDS and Triton X-100, eliminates the need for multiple purification steps and reduces the use of expensive and/or toxic reagents. For the tests, 10 representative plant species of the Cerrado biome were selected. The quality and quantity of extracted DNA were analyzed by spectrophotometer and agarose gel and its suitability for molecular studies evaluated through restriction enzyme digestion and PCR amplification with RAPD marker. The DNA obtained by our method was intact, free of contaminants and excellent for digestion and amplification via PCR. The DNA concentration among the species tested ranged from 156 to 1166 ng.μL-1 and the A260/A280 ratio of 1.78 to 1.92. Our protocol has also proved to be faster and cheaper compared to the DNA extraction methods already tested for Cerrado species. Therefore, the protocol presented here will be an important tool for the molecular analysis of Cerrado species.
Keywords:	Diversidade genética Metabólitos secundários SDS Triton X-100 Biotecnologia DNA Plantas do Cerrado Genetic diversity Secondary compounds SDS
Area (s) of CNPq:	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR
Language:	por
Country:	Brasil
Publisher:	Universidade Federal de Uberlândia
Program:	Programa de Pós-graduação em Biotecnologia
Quote:	SOUZA, Diego Cerveira de. Extração de DNA de plantas do Cerrado: metodologia inédita e eficiente. 2019. 68 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Universidade Federal de Uberlândia, Patos de Minas, 2019. DOI http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2019.323.
Document identifier:	http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2019.323
URI:	https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/24776
Date of defense:	15-Feb-2019
Appears in Collections:	DISSERTAÇÃO - Biotecnologia (Patos de Minas)

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