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Document type: Tese
Access type: Acesso Aberto
Title: Participação de quinase regulada por sinais extracelulares (ERK)-1/2 e IL-6 na susceptibilidade de diferentes populações de células trofoblásticas humanas à infecção por Toxoplasma gondii
Alternate title (s): Participation of extracellular signal-regulated kinase ERK -1/2 and IL-6 in the susceptibility of different populations of human trophoblastic cells to Toxoplasma gondii infection
Author: Victor, Fernanda Chaves de Oliveira
First Advisor: Ferro, Eloisa Amália Vieira
First coorientator: Barbosa, Bellisa Freitas
First member of the Committee: Gomes, Angelica de Oliveira
Second member of the Committee: Angeloni, Mariana Bodini
Third member of the Committee: Silva, Neide Maria da
Fourth member of the Committee: Oliveira, Juliana Gonzaga de
Summary: Na placentação inicial, as células de citotrofoblasto proliferam e diferencia-se por fusão celular para formar uma camada multinucleada, o sinciciotrofoblasto e também formam o trofoblasto extraviloso que invade a mucosa uterina, fenômeno essencial para uma gestação de sucesso. No curso da gestação, a infecção causada por Toxoplasma gondii pode desencadear manifestações graves e potencialmente afetar o desenvolvimento fetal.. Diferenças na susceptibilidade de células trofoblásticas à infecção por T. gondii devem ser avaliadas para subsidiar o estabelecimento de novas abordagens terapêuticas capazes de interferir no controle da infecção fetal sem comprometer o sucesso da gestação. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar a susceptibilidade de citotrofoblasto, sinciciotrofoblasto e células de trofoblasto extraviloso à infecção por T. gondii e possíveis mecanismos celulares envolvidos neste fenômeno. As células BeWo foram utilizadas como modelo de células de citotrofoblasto e sinciciotrofoblasto (após processo de sincicialização usando Forskolin e PMA), enquanto as células HTR-8/SVneo serviram como modelo de células de trofoblasto extraviloso. As células foram cultivadas sobre lamínulas redondas em placas de 6 poços e infectadas por taquizoitos de T. gondii (cepa RH) por 24 horas adicionais. Em paralelo, os três tipos de células foram tratados com inibidor de quinase regulada por sinais extracelulares (ERK)1/2 (PD98059) durante 3 horas e infectados por T. gondii por adicionais 24 horas. Os sobrenadantes foram coletados para avaliar o perfil das citocinas e as células para analisar quanto ao índice de infecção, número total de parasitos e fosforilação de quinases reguladas por sinais extracelulares (MAPKs). Como resultado, as células HTR-8/SVneo apresentaram maior susceptibilidade à infecção por T. gondii quando comparadas às células de sinciciotrofoblasto e citotrofoblasto, enquanto que o sinciciotrofoblasto foi o tipo de célula mais resistente à infecção parasitária. Além disso, células de citotrofoblasto e sinciciotrofoblasto produziram significativamente mais IL-6 do que as células HTR-8/SVneo. Por outro lado, as células HTR-8/SVneo apresentaram maior fosforilação de ERK1/2 do que as demais células trofoblásticas. A inibição de ERK1/2 reduziu a infecção por T. gondii e aumentou a produção de IL-6 em células HTR-8/SVneo. Assim, é possível sugerir que as células HTR-8/SVneo foram mais suscetíveis à infecção por T. gondii provavelmente porque essas células apresentaram maior fosforilação ERK1/2 e menores níveis de IL-6 em comparação com outras células trofoblásticas, sugerindo que esses mediadores podem ser importantes para favorecer a infecção parasitária neste tipo de população celular placentária.
Abstract: During initial placentation, cytotrophoblast cells proliferate and differentiate by cellular fusion to form a multinucleated layer, the syncytiotrophoblast, and also form the extravilous trophoblast that invades the uterine mucosa, an essential phenomenon for successful gestation. In the course of gestation, infection caused by Toxoplasma gondii can trigger serious manifestations and potentially affect fetal development. . Differences in the susceptibility of trophoblastic cells to T. gondii infection should be evaluated to support the establishment of new therapeutic approaches capable of interfering in the control of fetal infection without compromising the success of pregnancy. This study aimed to evaluate the susceptibility of cytotrophoblast, syncytiotrophoblast and extravillous trophoblast cells to T. gondii infection and possible mechanisms involved in this process. BeWo line cells were used as model of cytotrophoblast (before syncytialization process) and syncytiotrophoblast cells (after syncytialization process by using forskolin and PMA), whereas human HTR-8/SVneo cells served as model of extravillous trophoblast cells, according to previous studies. Cells were cultured in coverslips into 6-well plates and infected by T. gondii tachyzoites (RH strain) for additional 24 hours. In parallel, the three cell types were treated with extracellular signals regulated kinases (ERK) 1/2 inhibitor (PD98059) for 3 hours and infected by T. gondii for additional 24 hours. The supernatants were collected to measure cytokine profile, and the cells analyzed for infection index, total number of parasites and mitogen activated protein kinases (MAPKs) phosphorylation. HTR-8/SVneo cells showed the highest susceptibility to T. gondii infection when compared to syncytiotrophoblast and cytotrophoblast cells, whereas syncytiotrophoblast was the cell type more resistant to the parasite infection. In addition, cytotrophoblast and syncytiotrophoblast cells produced significantly more IL-6 than HTR-8/SVneo cells. On the other hand, HTR-8/SVneo cells showed higher ERK1/2 phosphorylation than cytotrophoblast and syncytiotrophoblast cells. ERK1/2 inhibition reduced T. gondii infection and increased IL-6 production in HTR-8/SVneo cells. Thus, it is possible to suggest that HTR-8/SVneo cells are more susceptible to T. gondii infection likely because these cells presented higher ERK1/2 phosphorylation and lower IL-6 levels compared to other cells, suggesting that these mediators can be important to favor the parasite infection in this type of trophoblastic population.
Keywords: Sinciciotrofoblasto
Syncytiotrophoblast
Citotrofoblasto
Cytotrophoblast
Htr-8/svneo
Erk1/2
Erk1/2
Toxoplasma gondii
Imunologia
Imunology
Trofoblastos
Trophoblast
Gravidez -complicações
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Program: Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
Quote: OLIVEIRA, Fernanda Chaves. Participação de quinase regulada por sinais extracelulares (ERK)-1/2 e IL-6 na susceptibilidade de diferentes populações de células trofoblásticas humanas à infecção por Toxoplasma gondii. 2018. 77 f. Tese (Doutorado em Imunologia e Parasitologia Aplicadas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2018.
Document identifier: http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2018.470
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/21834
Date of defense: 5-Apr-2018
Appears in Collections:TESE - Imunologia e Parasitologia Aplicadas

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