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Document type: Trabalho de Conclusão de Curso
Access type: Acesso Aberto
Title: Eficácia in vitro de lipossomas furtivos contendo antimoniato de meglumina e miltefosina para o tratamento da leishmaniose tegumentar americana
Author: Rogerio, Larissa Costa
Machado, Letícia Queiroz
First Advisor: Silva, Sydnei Magno da
First member of the Committee: Carvalho, Rogério Mendonça de
Second member of the Committee: Faria, Karen Ferraz
Summary: A leishmaniose tegumentar americana (LTA) constitui um sério problema de saúde pública e apresenta ampla distribuição com registro de casos em todas as regiões brasileiras. Por apresentar caráter zoonótico que envolve primariamente reservatórios e vetores silvestres seu controle torna-se difícil. A principal medida de controle da LTA no homem continua sendo a quimioterapia, principalmente com derivados do antimônio pentavalente (Sb5+) que, entretanto, pode causar toxicidade e diversos efeitos colaterais. Em razão disso, novas abordagens farmacológicas, como as baseadas em drogas leishmanicidas em formulações de lipossomas de circulação prolongada (lipossomas peguilados ou furtivos) têm sido sugeridas a fim de aumentar a eficácia terapêutica e reduzir os efeitos secundários deletérios. O objetivo deste trabalho foi preparar caracterizar e avaliar, in vitro, a eficácia terapêutica do antimoniato de meglumina encapsulado em lipossomas de ação prolongada contendo miltefosina para o tratamento da LTA. Lipossomas peguilados contendo miltefosina (HePC-PEG) foram preparados utilizando o método "desidratação e reidratação de vesículas", ou DRV, em água a partir de miltefosina (HePC) e dos lipídeos colesterol, dipalmitoilfosfatidilcolina, diestearoilfosfatidiletanolamina-polietilenoglicol 2000 e dicetilfosfato. Os lipossomas peguilados contendo miltefosina e antimoniato de meglumina (HePC-PEG/AM), foram obtidos pela reidratação das vesículas de HePC-PEG com solução aquosa de antimoniato de meglumina (AM). A caracterização das vesículas (diâmetro hidrodinâmico médio das vesículas, índice de polidispersão (IP) e potencial zeta (Z) das formulações lipossomais foi determinada por espectroscopia de correlação de fótons e a taxa de encapsulação de Sb por espectroscopia de absorção atômica com forno de grafite. Os ensaios de concentração citotóxica 50% (CC50) e atividade leishmanicida das formulações concentração inibitória (CI50) foram realizados em macrófagos murinos, utilizando o método colorimétrico MTT, e em formas promastigotas de Leishmania amazonensis, utilizando o método colorimétrico de redução da resazurina, respectivamente. Foi avaliada, ainda, a eficácia da formulação contra amastigotas intracelulares 24h, 48h, e 72h após o tratamento. A formulação HePC-PEG/AM teve diâmetro hidrodinâmico médio de 200,85nm, IP=0,074 e Z= -66mV, compatíveis com um sistema nanoestruturado estável e monodisperso. HePC-PEG/AM apresentou CC50 igual a 103,21µg/mL, taxa maior que a miltefosina em sua forma livre (41,59µg/mL) sugerindo menor toxicidade celular da droga em formulação lipossomal. O valor de CI50 para HePC-PEG/AM foi igual a 28,34 µg/mL, enquanto para miltefosina livre o CI50 teve o valor de 49,59 µg/mL. Nos ensaios contra amastigotas intracelulares, a formulação peguilada reduziu significativamente as taxas de infecção dos macrófagos em relação a AM e miltefosina, 72h após o tratamento, e em relação ao controle sem infecção em todos os tempos avaliados. Em conclusão, a formulação HePC-PEG/AM apresentou características de tamanho reduzido das vesículas, estabilidade elétrica e monodispersão, além de proporcionar significativa redução das taxas de infecção de macrófagos por Leishmania amazonensis, in vitro, sendo esta maior do que a proporcionada pelas drogas na sua forma livre indicando efeito sinérgico entre os fármacos encapsulados.
Abstract: American tegumentary leishmaniasis (ATL) is a serious health problem worldwide distributed with case notified in all Brazilian regions. ATL is a zoonosis that involves primarily wild reservoirs and vectors which turns difficult the control of the disease. Despite of its limitations treatment still remains as main control measure for all clinical forms of leishmaniasis, including ATL. Even though the use of pentavalent antimonials (Sb5+) presents several limitations, these compounds are still the first-line drugs for the treatment of ATL, however, they can cause toxicity leading to important side effects. Because of this, a novel pharmacological approach based on leishmanicidal drugs in stealth liposome formulations have been suggested in order to increase the therapeutic efficacy and reduce side effects of these conventional drugs. The aim of this work was to prepare, characterize and evaluate, in vitro, the therapeutic efficacy of meglumine antimoniate encapsulated in stealth liposomes containing miltefosine for the treatment of cutaneous leishmaniasis. Stealth liposome containing miltefosine (HePC-PEG) was prepared using the "dehydration and rehydration vesicles" method (DRV) in water using miltefosine (HePC), cholesterol, dipalmitoylphosphatidylcholine, distearoylphosphatidylethanolamine-polyethylene glycol 2000 and diethylphosphate. The stealth liposome containing miltefosine and meglumine antimoniate (HePC-PEG/AM) was obtained by rehydration of HePC-PEG vesicles with an aqueous solution of meglumine antimoniate. The vesicle characterization (hydrodynamic diameter, polydispersity index (PI) and zeta potential (Z)) of the formulations was determined by photon correlation spectroscopy and the Sb encapsulation rate by graphite furnace atomic absorption spectroscopy. The cytotoxicity (CC50) and leishmanicidal activity of the formulations (IC50) were performed in murine macrophages, using the MTT colorimetric method, and in promastigote forms of Leishmania amazonensis, using the colorimetric method of resazurin reduction, respectively. The efficacy of the formulation against intracellular amastigotes at 24h, 48h, and 72h after treatment was also evaluated. The HePC-PEG/AM formulation presented a hydrodynamic diameter of 200.85nm, PI= 0.074 and z= -66mV. HePC-PEG/AM presented CC50=103.21μg/mL, a higher rate than the CC50 obtained by the non-encapsulated miltefosine (41.59μg / mL) suggesting lower cellular toxicity of the drug in liposomal formulation. The IC50 value for HePC-PEG/AM was 28.34μg/mL whereas the non-encapsulated miltefosine the IC50 was 49.59 μg/mL. In the intracellular amastigote assays, the stealth formulation significantly reduced macrophage infection rates when compared to AM and miltefosine, 72h after treatment and to non treated control at all times evaluated. In conclusion, the HePC-PEG/AM formulation showed small hydrodynamic vesicle size, electrical stability and monodispersion, as well as providing significant reduction in the rates of macrophage infection by Leishmania amazonensis, in vitro, which was greater than the rates obtained by the conventional drugs suggesting synergy/addictive effect between these drugs when encapsulated in stealth liposomes.
Keywords: Lipossomas furtivos
Antimoniato de meglumina
Miltefosina
Leishmaniose tegumentar
Meglumine antimoniate
Stealth Liposomes
Tegumentary leishmaniasis
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FISIOTERAPIA E TERAPIA OCUPACIONAL
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Quote: ROGERIO, Larissa Costa; MACHADO, Letícia Queiroz. Eficácia in vitro de lipossomas furtivos contendo antimoniato de meglumina e miltefosina para o tratamento da leishmaniose tegumentar americana. 2017. 31 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Fisioterapia) – Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2017.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/19287
Date of defense: 30-Jun-2017
Appears in Collections:TCC - Fisioterapia

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