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metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Avaliação de anticorpos monoclonais reativos aos antígenos P30, P22 e P97 de Toxoplasma gondii, em ensaio imunoenzimático reverso, utilizados na detecção de anticorpos IgG, IgM e IgA para o sorodiagnóstico da Toxoplasmose Humana
metadata.dc.creator: Carvalho, Fernando dos Reis de
metadata.dc.contributor.advisor1: Mineo, Jose Roberto
metadata.dc.contributor.referee1: Andrade Junior, Heitor Franco de
metadata.dc.contributor.referee2: Pena, Janethe Deolina de Oliveira
metadata.dc.contributor.referee3: Michelin, Marcia Antoniazi
metadata.dc.description.resumo: O diagnóstico da toxoplasmose se baseia na detecção de anticorpos específicos em amostras de soro de pacientes, por meio de técnicas sorológicas, particularmente as imunoenzimáticas. As maiores dificuldades na interpretação destes testes referem-se aos resultados falso-positivos e falso-negativos, principalmente com relação à detecção de anticorpos IgM e IgA anti-Toxoplasma gondii, tornando difícil o estabelecimento do diagnóstico da infecção primária e infecção congênita. O presente trabalho objetivou avaliar a utilização de anticorpos monoclonais (mAbs) A3A4 (anti-p30), A4D12 (antip22) e 1B8 (anti-p97) em um ensaio imunoenzimático (ELISA) reverso para a detecção de anticorpos IgG, IgM e IgA contra os antígenos p30, p22 e p97 de T. gondii em soros humanos. Foram analisadas 175 amostras de soros de pacientes com infecção recente (n=45), na fase de transição (n=40) e com infecção crônica (n=55), bem como de indivíduos soronegativos (n=35), definidos por testes sorológicos convencionais. Os resultados obtidos por ELISA reverso usando mAbs (ELISA-mAb) foram comparados aos do ELISA indireto clássico usando antígeno solúvel de T. gondii (ELISA-STAg). O mAb A3A4 reconhece um epítopo conformacional no antígeno de superfície p30, enquanto os mAbs A4D12 e 1B8 reconhecem epítopos lineares, respectivamente, no antígeno de superfície p22 e no antígeno citoplasmático p97 de taquizoítas de T. gondii. Em testes ELISA de inibição utilizando soros positivos para competir com os mAbs pela ligação a seus respectivos antígenos, o mAb A3A4 apresentou maior capacidade de competição que os mAbs A4D12 e 1B8. Os resultados dos ELISA-mAbs A3A4 e A4D12 para a detecção de IgG anti-p30 e anti-p22, respectivamente, foram altamente correlacionados com aqueles obtidos pelo ELISA-STAg. Em relação à detecção de IgM e IgA, os resultados do ELISA-mAb A4D12 (anti-p22) foram mais correlacionados com aqueles determinados pelo ELISA-STAg. ELISA-mAb 1B8 não mostrou associações significativas com ELISA-STAg para todos os isotipos de anticorpos analisados. Em conclusão, a detecção de anticorpos IgG, IgM e IgA específicos aos antígenos p30, p22 e p97 de T. gondii foi demonstrada, pela primeira vez, utilizando um ELISA reverso com mAbs que capturam estes antígenos presentes no STAg. Desta forma, os ELISAmAbs A3A4 e A4D12 para a captura dos antígenos p30 e p22 mostraram representar métodos alternativos para a detecção de anticorpos específicos a T. gondii e podem ser considerados como ferramentas adicionais para um diagnóstico mais seguro da toxoplasmose, particularmente nos casos de infecção primária e congênita.
Abstract: The diagnosis of toxoplasmosis can be achieved by detecting specific antibodies in patient serum samples using serological methods, mainly the enzymatic ones. But these tests give a lot of false-positive and false-negative results, mostly for IgM and IgA antibodies, making the diagnosis of primary and congenital infections a challenging situation. This way, the present study aimed to evaluate the diagnostic performance of the monoclonal antibodies (mAbs) A3A4 (anti-p30), A4D12 (anti-p22) e 1B8 (anti-p97) in a reverse ELISA (ELISA-mAb) to detect IgG, IgM and IgA antibodies anti-T. gondii in human serum samples. It was analysed 175 serum samples from patients at different stages of infection: recent (n=45), transitional phase (n=40) and chronic (n=55), and negative subjects (n=35) defined by conventional T. gondii serology. The achieved results were compared with those obtained by indirect ELISA using soluble T. gondii antigen (ELISA-STAg). The mAb A3A4 recognizes a conformational epitope in the p30 surface antigen of T. gondii tachyzoites, while A4D12 and 1B8 recognize linear epitopes in the p22 surface and p97 cytoplasmatic antigens, respectively. In an inhibition ELISA test, in which human sera with specific T. gondii IgG antibodies were used to compete with the mAbs for binding to their specific antigens, it was demonstrated that the mAb A3A4 rather than A4D12 and 1B8 showed a better competition capability. The results achieved by reverse ELISA-IgG using the mAbs A3A4 or A4D12 to detect IgG antibodies anti-p30 and anti-p22, respectively, were highly correlated with those obtained by ELISA- STAg, whereas the ELISA-mAb using A4D12 (anti-p22) for the detection of IgM and IgA isotypes showed the highest correlation with ELISA-STAg for both isotypes. ELISA-mAb using 1B8 did not showed significant associations with ELISA-STAg for all the immunoglobulin isotypes researched. In conclusion, this is the first report analyzing the performance of a reverse ELISA for the detection of IgG, IgM and IgA isotypes towards native p22, p30 and p97 molecules from STAg, using a panel of human sera from patients with recent and chronic toxoplasmosis. Thus, reverse ELISA based on capture of native p22 and p30 antigens of STAg by mAbs constitutes an alternative approach that may be considered as an additional tool for the serological diagnosis of toxoplasmosis, particularly in cases of primary and congenital infections.
Keywords: Toxoplasma gondii
Sorodiagnóstico
Anticorpos monoclonais
ELISA indireto
ELISA reverso
Serodiagnosis
Monoclonal antibodies
Indirect ELISA
Reverse ELISA
Toxoplasmose
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências Biológicas
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
Citation: CARVALHO, Fernando dos Reis de. Avaliação de anticorpos monoclonais reativos aos antígenos P30, P22 e P97 de Toxoplasma gondii, em ensaio imunoenzimático reverso, utilizados na detecção de anticorpos IgG, IgM e IgA para o sorodiagnóstico da Toxoplasmose Humana. 2006. 100 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2006.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/16724
Issue Date: 30-Aug-2006
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Imunologia e Parasitologia Aplicadas

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