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Document type: Dissertação
Access type: Acesso Aberto
Title: Susceptibilidade diferencial de células trofoblásticas humanas (BeWo) e cervicais uterinas (HeLa) à infecção por Neospora caninum
Author: Carvalho, Julianne Vargas de
First Advisor: Silva, Deise Aparecida de Oliveira
First coorientator: Mineo, Jose Roberto
First member of the Committee: Ferro, Eloisa Amália Vieira
Second member of the Committee: Oliveira, Karine Rezende de
Summary: Neospora caninum é um parasito intracelular obrigatório, estreitamente relacionado com Toxoplasma gondii, e considerado uma das principais causas de aborto e neosporose congênita em bovinos em todo o mundo. Como células trofoblásticas agem nos mecanismos de defesa imunológica inata na interface materno-fetal, e não há dados disponíveis sobre a interação deste parasito com o trofoblasto humano, este estudo teve como objetivo verificar a susceptibilidade das linhagens de células trofofoblásticas humanas (BeWo), comparado às linhagens cervicais uterinas (HeLa), à infecção por Neospora caninum. Células BeWo e HeLa foram infectadas com diferentes proporções (parasito:célula) de taquizoítos de Neospora caninum e analisadas em diferentes tempos após a infecção quanto à viabilidade celular, utilizando a análise colorimétrica do tetrazólio de metiltiazol (MTT), e lise celular, por meio da mensuração de lactato desidrogenase (LDH). Ambas as linhagens celulares também foram avaliadas quanto à produção de citocinas e índices de infecção e replicação intracelular parasitária quando pré-tratadas ou não com o antígeno lisado de Neospora (NLA) ou interferon-gama (IFN-γ) recombinante humano. Foi observado que Neospora caninum induziu um aumento na viabilidade celular em ambas as linhagens, principalmente em células BeWo nas primeiras horas de infecção, sugerindo que a infecção pelo parasito poderia ser capaz de inibir precocemente a morte celular e/ou induzir a proliferação celular. A infecção por Neospora caninum induziu produção aumentada do fator inibitório da migração de macrófagos (MIF), principalmente em células HeLa, que foi ainda maior com o pré-tratamento das células com NLA ou IFN-γ. Inversamente, a infecção parasitária diminuiu a produção do fator de crescimento e transformação-beta (TGF-β), principalmente em células BeWo, que foi ainda menor quando as células foram pré-tratadas com NLA ou IFN-γ. Células HeLa foram mais susceptíveis à infecção por Neospora caninum que células BeWo e o pré-tratamento com IFN-γ resultou em significante decréscimo na porcentagem de células infectadas em ambas as linhagens celulares, sendo que o controle do crescimento parasitário foi mediado por IFN-γ através de mecanismo dependente da enzima indoleamina-2,3-dioxigenase (IDO) somente em células HeLa. Em conclusão, este estudo demonstrou pela primeira vez que células BeWo e HeLa são alvos potenciais como células hospedeiras para Neospora caninum, embora apresentando diferenças na susceptibilidade à infecção, produção de citocinas e viabilidade celular, refletindo em estratégias utilizadas pelo parasito para sobrevivência dentro das células hospedeiras.
Abstract: Neospora caninum is an obligate intracellular parasite, closely related to Toxoplasma gondii, and considered a major cause of abortion and congenital neosporosis in cattle worldwide. As trophoblast cells act in mechanisms of innate immune defense at fetal-maternal interface, and no data are available about the interaction of this parasite with human trophoblasts, this study aimed to verify the susceptibility of human trophoblastic (BeWo) compared to uterine cervical (HeLa) cell lines to Neospora caninum infection. BeWo and HeLa cells were infected with different parasite:cell ratios of Neospora caninum tachyzoites and analyzed in different times after infection for cell viability using the colorimetric assay of thiazolyl blue tetrazole (MTT) and cell lysis by measuring the lactate dehydrogenase (LDH) activity. Both cell lines were also evaluated for cytokine production and parasite infection/replication assays when pretreated or not with Neospora lysate antigen (NLA) or human recombinant interferon-gamma (IFN-γ). It was found that Neospora caninum induced increased cell viability in both cell lines, more evidently in BeWo cells, in the first hours of infection, suggesting that parasite infection could to be able to early inhibit cell death and/or to induce cell proliferation. Also, Neospora caninum infection induced upregulation of the macrophage migration inhibitory factor (MIF), mostly in HeLa cells, which was improved with cell pretreatment with NLA or IFN-γ. Conversely, parasite infection induced downregulation of the transforming growth factor (TGF-β), mostly in BeWo cells, which was more decreased with NLA or IFN-γ pretreatment. HeLa cells were more susceptible to Neospora caninum infection than BeWo cells, and IFN-γ pretreatment resulted in significant decrease in the percentage of infected cells in both cell lines, and the control of the parasite growth was mediated by IFN-γ through an indoleamine-2,3- dioxygenase (IDO)-dependent mechanism in HeLa cells only. In conclusion, this study demonstrated for the first time that BeWo and HeLa cells are potential targets as host cells for Neospora caninum, although presenting differences in susceptibility to infection, cytokine production and cell viability, reflecting in strategies used by the parasite for survival inside the host cells.
Keywords: Neospora caninum
Trofoblasto humano
Células beWo
Células heLa
Citocinas
Human trophoblasts
BeWo cells
HeLa cells
Cytokines
Neosporose
Neospora
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA
Language: por
Country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Institution Acronym: UFU
Department: Ciências Biológicas
Program: Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
Quote: CARVALHO, Julianne Vargas de. Susceptibilidade diferencial de células trofoblásticas humanas (BeWo) e cervicais uterinas (HeLa) à infecção por Neospora caninum. 2010. 77 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2010.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/16651
Date of defense: 25-Feb-2010
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Imunologia e Parasitologia Aplicadas

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