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Document type: Dissertação
Access type: Acesso Aberto
Title: Identificação de isoformas antigênicas de Dermatophagoides pteronyssinus reconhecidas por anticorpos IgE e IgG1 em pacientes atópicos e não atópicos
Author: Miranda, Juliana Silva
First Advisor: Taketomi, Ernesto Akio
First coorientator: Silva, Deise Aparecida de Oliveira
First member of the Committee: Cunha Junior, Jair Pereira da
Second member of the Committee: Cardoso, Cristina Ribeiro de Barros
Summary: O ácaro da poeira domiciliar Dermatophagoides pteronyssinus (Dp) é uma das principais fontes de alérgenos intradomiciliar em todo o mundo, e por isto considerado importante na sensibilização de indivíduos predispostos geneticamente. Alguns alérgenos deste ácaro podem ocorrer como isoalérgenos diferenciando na sequência dos aminoácidos ou mesmo no padrão de glicosilação, o que pode causar diferenças na sensibilização alergênica. O objetivo do presente trabalho foi investigar novos antígenos imunodominantes com potencial aplicabilidade no diagnóstico laboratorial e monitoramento de indivíduos atópicos sob imunoterapia alérgeno-específica. Para isto, o extrato de Dp foi separado por eletroforese bidimensional (2D) com subsequente immunoblotting para detecção de componentes ligantes de IgE e IgG1 específica. O pool de soros testado no immunoblotting 2D foi escolhido a partir de um painel de soros positivos a alérgenos de Dp determinados por immunoblotting 1D para IgE e IgG1 específica em pacientes atópicos (A) e IgG1 em indivíduos não atópicos (NA), grupos estes definidos por teste cutâneo de puntura (TCP) e níveis específicos de IgE e IgG1 determinados por ELISA. Os níveis de IgE a Dp bem como a soropositividade foram maiores em atópicos (mediana IE = 3,8; 100%) do que em não atópicos (mediana IE = 0,7; 0%) (P<0,0001), enquanto níveis de anticorpos IgG1 específicos a Dp não mostraram diferença significante entre os grupos (mediana IE = 2,9; 84% vs mediana IE = 2,5; 86%). Os principais alérgenos ligantes de IgE determinados por immunoblotting 1D foram as bandas de 15 kDa, 60 kDa e 103 kDa, enquanto os principais alérgenos ligantes de IgG1 foram as bandas >56 kDa. A eletroforese 2D do extrato de Dp mostrou uma resolução de mais de 70 spots na faixa de ponto isoelétrico (pI) 3-10 e massa molecular 11-110 kDa. O immunoblotting 2D revelou diferenças nos padrões de ligação de IgE e IgG1, com vários spots reconhecidos por anticorpos IgE entre 15 e 103 kDa (pI 5,1-8,0). A reatividade de IgG1 no grupo A foi observada principalmente aos spots mais fortemente reconhecidos na faixa de maior massa molecular (70-103 kDa) e menor pI 5,1-6,6. Para a reatividade de IgG1 no grupo NA, os spots mais fortemente reconhecidos foram observados entre 85-103 kDa (pI 5,1-5,8). Assim, a eletroforese 2D com a subseqüente realização do immunoblotting permitiu a identificação de isoalérgenos específicos reconhecidos por diferentes isotipos de anticorpos em atópicos e não atópicos, o que pode contribuir de maneira relevante no desenvolvimento de potenciais candidatos para uso em diagnóstico e também no monitoramento do níveis de IgE e IgG1 específicos de pacientes alérgicos sob imunoterapia.
Abstract: The house dust mite Dermatophagoides pteronyssinus (Dp) is a major source of indoor allergens in the world and considered important for sensitization of genetically predisposed subjects. Some allergens from this mite can occur as isoallergens with differences in amino acid sequences or glycosylation, leading to differences in allergenic sensitization. The aim of this study was to investigate new immunodominants antigens with potential application for the laboratorial diagnosis and monitoring of atopic patients under allergen-specific immunotherapy. Dp extract was separated by two-dimensional (2D) electrophoresis with subsequent immunoblotting for determination of specific IgE and IgG1 binding components. Pooled human sera tested in 2D immunoblotting were chosen from a panel of sera positive to Dp allergens determined by 1D immunoblotting for specific IgE and IgG1 in atopic patients (A) and IgG1 in non-atopic subjects (NA). Patients were selected by skin prick test (SPT) and levels of specific IgE and IgG1 by ELISA. Levels of IgE to Dp and seropositivity were higher in atopics (median EI = 3.8; 100%) than non-atopics (median EI = 0.7; 0%) (P < 0.0001), while levels of Dp-specific IgG1 showed no significant difference between the groups (median EI = 2.9; 84% vs median EI = 2.5; 86%). The major IgE-binding components determined by 1D immunoblotting were the 15 kDa, 60 kDa and 103 kDa bands, and the major IgG1-binding allergens were bands >56 kDa. 2D gel electrophoresis of Dp extract showed a resolution of more than 70 spots throughout the separation range of isoelectric point (pI) 3-10 and molecular size of 11-110 kDa. 2D immunoblotting revealed differences in IgE- and IgG1-binding patterns, with several spots recognized by IgE antibodies ranging from 15 to 103 kDa and pI 5.1-8.0. For IgG1 reactivity in atopic patients, strongly recognized spots were observed at ranges of higher molecular masses (70-103 kDa) and lower pI (5.1- 6.6). For IgG1 reactivity in non-atopic subjects, the most strongly recognized spots were observed ranging from 85 to 103 kDa (pI 5.1-5.8). 2D electrophoresis with subsequent immunoblotting allowed the identification of specific isoallergens recognized by different antibody isotypes in atopic and non-atopic subjects. This information can be used to improve the development of potential candidates for using in diagnostic as well as in monitoring of the levels of specific IgE and IgG1 in atopic patients under immunotherapy.
Keywords: Ácaro da poeira domiciliar
Dermatophagoides pteronyssinus
Immunoblotting bidimensional
Alergia
House dust mite
Two-dimensional immunoblotting
Allergy
Eletroforese bidimensional
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA
Language: por
Country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Institution Acronym: UFU
Department: Ciências Biológicas
Program: Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
Quote: MIRANDA, Juliana Silva. Identificação de isoformas antigênicas de Dermatophagoides pteronyssinus reconhecidas por anticorpos IgE e IgG1 em pacientes atópicos e não atópicos. 2010. 87 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2010.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/16650
Date of defense: 24-Feb-2010
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