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metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Caracterização bioquímico-farmacológica de uma PLA2 ácida isolada da peçonha de Bothropoides pauloensis (Bothrops paulo- ensis)
metadata.dc.creator: Ferreira, Francis Barbosa
metadata.dc.contributor.advisor1: Ávila, Veridiana de Melo Rodrigues
metadata.dc.contributor.referee1: Rodrigues, Renata Santos
metadata.dc.contributor.referee2: Fuly, André Lopes
metadata.dc.description.resumo: As fosfolipases A2 são moléculas pequenas, com peso molecular variando de 13 a 18 kDa, e um dos maiores constituintes das peçonhas botrópicas/botropóicas, exercendo uma variedade de efeitos tóxicos como neurotoxicidade, miotoxicidade, citotoxicidade, inibição ou ativação da agregação plaquetária, dentre outros. A maioria das PLA2 tóxicas são proteínas básicas, no entanto as isoformas ácidas e suas possíveis ações são menos conhecidas. Neste trabalho, descrevemos a purificação e caracterização química, enzimática e farmacológica de uma nova fosfolipase A2 ácida da peçonha de Bothropoides pauloensis. Esta enzima, denominada BpPLA2-TXI, foi purificada através de quatro passos cromatográficos representando 1,5 % da peçonha total. É uma proteína monomérica de 13.6 kDa estimada por análises em MALDI TOF e ponto isoelétrico teórico calculado em 4.98. O cDNA codificante para a PLA2 foi obtido por RT-PCR a partir do RNA total da glândula de peçonha, utilizando oligonucleotídeos baseados na sequência parcial de aminoácidos desta toxina. A sequência N-terminal da proteína dos primeiros 48 resíduos de aminoácidos, bem como a sequência completa deduzida partir de seu cDNA, apresentou 122 resíduos de aminoácidos os quais revelaram uma significante similaridade com as Asp49 ácidas de outras peçonhas de serpentes. A BpPLA2-TXI é cataliticamente ativa, com atividade específica de 142 U/mg, além de ser estável sob diferentes temperaturas e pHs. Foi capaz de inibir a agregação plaquetária induzida pelo colágeno, além de induzir edema e efeito miotóxico. A análise filogenética mostra que a BpPLA2-TXI forma um grupo com outras PLA2 Asp49 ácidas dos gêneros Bothropoides e Bothrops, as quais são caracterizadas por possui alta atividade catalítica associada com a capacidade de inibir agregação plaquetária.
Abstract: The phospholipases A2 are small molecules, with molecular mass from 13 to 18 kDa, and one of the most abundant components present in the botropics/botropoics snake venoms, exerting a variety of toxic effects as neurotoxicity, myotoxicity, citotoxicity, anti or pro-platelet aggregation, and others. Most of the toxic PLA2 are basic proteins, therefore, the acid PLA2s isoforms and their possible roles are less understood. In this work, we described the purification and physic-chemical and pharmacological characterization of an acidic phospholipase A2 from Bothropoides pauloensis. This enzyme, named BpPLA2-TXI, was purified through four chromatographic steps and it represents 2,4% of the snake venom. It is a monomeric protein with 13.6 kDa by MALDI-TOF and theoretical isoeletric point of 4,98. The codified cDNA was obtained by RT-PCR from venom gland total RNA, utilizing oligonucleotides based on the amino acids partial sequences for this toxin. The N-terminal sequence (fourty-eight amino acids residues) as well as the complete sequence deduced by cDNA, show 122 amino acids residues which revealed significant similarity with other acidic Asp49 PLA2. BpPLA2-TXI is catalytically active, with specific activity of 142 U/mg and it is thermo- and pH-stable. Besides its catalytic activity, BpPLA2-TXI displayed some farmacological effects, as inhibited platelet aggregation induced by collagen or ADP, induced edema and myotoxicity. The phylogenetic analyses shows that BpPLA2-TXI forms a group with other acidic PLA2 Asp49 from Bothropoides and Bothrops genus, wich are characterized by the a catalytic activity associated with anti-platelet effects.
Keywords: Fosfolipase A2 D49
Miotoxina
cDNA
D49 Phospholipase A2
Bothropoides pauloensis
Bothrops pauloensis
Myotoxic
Bioquímica
Serpente peçonhenta - Peçonha
Bothrops
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências Biológicas
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
Citation: FERREIRA, Francis Barbosa. Caracterização bioquímico-farmacológica de uma PLA2 ácida isolada da peçonha de Bothropoides pauloensis (Bothrops paulo- ensis). 2011. 81 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2011.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15885
Issue Date: 27-Jul-2011
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Genética e Bioquímica

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