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https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15838| Document type: | Dissertação |
| Access type: | Acesso Aberto |
| Title: | Detecção e localização de proteínas relacionados às MRJPs e de suas possíveis proteínas sítio-ligantes no cérebro e glândula hipofaringeal da abelha Apis mellifera |
| Author: | Peixoto, Leonardo Gomes |
| First Advisor: | Espindola, Foued Salmen |
| First member of the Committee: | Hartfelder, Klaus Hartmann |
| Second member of the Committee: | Palma, Mario Sergio |
| Summary: | RESUMO GERAL As MRJPs são as principais proteínas hidrossolúveis da geléia real da abelha Apis mellifera L. Neste trabalho, detectou-se e imunolocalizou-se proteínas relacionados às MRJPs e suas possíveis proteínas sítio-ligantes no cérebro e glândula hipofaringeal da abelha Apis mellifera. Polipeptídeos de massa molecular de 57, 70 foram correlacionados às MRJP1 e MRJP3 e o polipeptídio de massa molecular de 128kDa um novo polipeptídeo possivelmente relacionado a essa família de proteínas foram encontrados nas regiões analisadas do cérebro dessa abelha. Alem disso, 21 peptídeos, gerados por phage displays, foram utilizados em bioinformática para analisar as regiões antigênicas da MRJP1, as quais se repetiram nas outras MRJPs analisadas, bem como localizar possíveis proteínas sítio-ligantes com as MRJPs no sistema nervoso da abelha. Esses resultados trazem uma importante contribuição para a compreensão do papel biológico desta interessante família de proteínas nos teciodo da abelha A. mellifera. RESUMO - CAPÍTULO I As principais proteínas da geléia real (MRJPs) são uma família única de proteínas da abelha Apis mellifera, as quais são altamente expressa na glândula hipofaringeal das abelhas operárias. Para identificar proteínas relacionadas às MRJPs no sistema nervoso destas abelhas, anticorpos foram imunopurificados e testados para revelar polipeptídeos que são reativos a estes anticorpos no cérebro e glândula hipofaringeal desta abelha. As identidades entre as seqüências das MRJPs foram analisadas por bioinformática, e a distribuição das MRJPs nestes tecidos foram testados imunohistoquimicamente. Dentre as espécies de himenópteros investigados somente a A. mellfiera mostrou reação cruzada dos polipeptídios com os anticorpos anti-MRJP1 e o anti-MRJPtotal. Três polipeptídios, p57, p70 e p128, foram detectados na cabeça, cérebro e glândula hipofaringeal desta abelha, apresentado diferenças entre castas, idade e regiões investigadas do cérebro. Esses resultados mostraram: a) O p57 foi o único polipeptídio imunoprecipitado pelo anti-MRJP1 sugerindo que esse polipeptídio pode estar relacionado com uma proteína específica do cérebro MRJP1; b) O p70, baseado na massa molecular relativa, pode estar relacionado com a MRJP3 e c) o p128 é um novo polipeptídio relacionado às MRJPs em regiões do cérebro da abelha e glândula hipofaringeal detectado com o anti-MRJP total e anti-MRJP1 mostrando a localização das MRJPs nas diferentes áreas como os corpos de cogumelo, lobos antenal e ópticos e com uma forte marcação na glândula hipofaringeal. Neste estudo, nós mostramos polipeptídios imunoreativos com anticorpos para as MRJPs no cérebro e glândula hipofaringeal da A. mellifera. A localização das MRJPs em regiões do cérebro pode contribuir para elucidar o papel biológico desta família de proteínas desta abelha. RESUMO - CAPÍTULO II As MRJPs são as principais proteínas hidrossolúveis da geléia real da abelha Apis mellifera L., com homologia restrita às proteínas Yellow descritas para Drosophila melanogaster. Os transcritos das MRJPs encontrados no cérebro da abelha operária e a localização das MRJPs em regiões específicas do cérebro da A. mellifera abriram perspectivas para o estudo de proteínas relacionadas às MRJPs no sistema nervoso da abelha. As regiões antigênicas da MRJP1 e a presença de proteínas sítio-ligantes com as MRJPs no cérebro da abelha foram investigadas a partir dos 21 peptídeos selecionados por Biopanning e gerados por phage display. O pool desses peptídeos foi usado como sonda para imunolocalizar proteínas sítio-ligantes com a MRJP1. Os sítios mapeados nessa proteína apresentaram-se repetidos em todas as outras MRJPs analisadas. Imunodetectou-se por Western blotting, das amostras dos fagos selecionados, os peptídeos imunoreativos que mimetizaram as regiões antigênicas da MRJP1. Imunolocalizou-se nos corpos de cogumelo, lobos ópticos e glândula hipofaringeal de todas as castas da abelha A. mellifera proteínas imunoreativas ao pool dos peptídeos gerados contra as MRJPs. Os resultados do presente estudo indicam a presença de proteínas sítio-ligantes com as MRJPs no sistema nervoso da abelha, sugerindo uma nova interação dessas proteínas com seus ligantes no cérebro da abelha A. mellifera. |
| Abstract: | ABSTRACT - CHAPTER I The major royal jelly proteins (MRJPs) are a honeybee (Apis mellifera) unique protein family, which highly expressed in the hypopharyngeal gland of the worker bee. To identify proteins related to the MRJPs in the bee s nervous system, antibodies were immunopurified and assayed to reveal polypeptides that are reactive to these antibodies in the bee brain and hypopharyngeal gland. The identities between the MRJPs sequences were analyzed through bioinformatics, and the distribution of the MRJPs in these tissues was investigated immunohistochemically. Among some hymenoptera species investigated only Apis mellifera showed polypeptides that cross-reacted to the anti-MRJP1 and anti- MRJP total antibodies. Three polypeptides, p57, p70 and p128, were detected in the honeybee head, brain and hypopharyngeal gland with some detection pattern upon differences of bee caste, age and brain areas investigated. The results showed: a) p57 was is the only polypeptide immunoprecipitated by anti-MRJP1 suggesting that it may be related to a MRJP1 brain specific protein; b) p70, based in the relative molecular mass, may be related to MRJP3 and c) p128 is a new not yet reported MRJP-like protein in the brain sections of the bee brain and hypopharyngeal gland probed with both anti-MRJP total and anti-MRJP1 showed the localization of MRJPs in different brain areas such as mushroom bodies, optical and antennal lobe and a strong staining in the whole gland. In this study, we showed polypeptides immunoreactive to the antibodies for the MRJPs in the brain and hypopharyngeal gland of A. mellifera. The localization of these MRJPs in regions of the brain may contribute to elucidate the biological role of this family of proteins present in these honeybees. ABSTRACT - CHAPTER II The major royal jelly proteins (MRJPs) of Apis mellifera honeybee are water soluble proteins with restricted homology to Yellow proteins described for Drosophila melanogaster. MRJPs transcripts found in the workers honeybees brain and the MRJPs localization in specific regions of A. mellifera brain opened perspectives for the study about MRJPs related proteins in the honeybee nervous system. The MRJP1 antigenic regions and targets proteins to MRJPs in honeybee brain were investigated using 21 peptides selected by Biopanning and generated by phage display. The pool of these peptides was used as probe to immunolocalize MRJP1-putative binding protein. The MRJP1 identified sites had showed identicals regions in all the others MRJPs analyzed. The peptides that mimetize MRJP1 antigenic regions were imunnodetected in the selected phage samples. The MRJP1 putative binding protein were imunnolocalized in the mushroom bodies, optic lobes and hypopharyngeal gland of all the A. mellifera honeybee castes. This study appoints the presence of MRJPs binding proteins in the honeybee nervous system, suggesting a new interaction of these proteins with its ligands in A. mellifera honeybee brain. |
| Keywords: | Apis mellifera Cérebro da abelha Imunodetecção de polipeptídios Imunolocalização de polipeptídios Phage display Geléia real MRJPs Glândula hipofaringeal Imunolocalização Royal jelly Honeybee brain Hypopharingeal gland Immunolocalization Phage display Honeybee Abelhas |
| Area (s) of CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA |
| Language: | por |
| Country: | BR |
| Publisher: | Universidade Federal de Uberlândia |
| Institution Acronym: | UFU |
| Department: | Ciências Biológicas |
| Program: | Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica |
| Quote: | PEIXOTO, Leonardo Gomes. Detecção e localização de proteínas relacionados às MRJPs e de suas possíveis proteínas sítio-ligantes no cérebro e glândula hipofaringeal da abelha Apis mellifera. 2006. 101 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2006. |
| URI: | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15838 |
| Date of defense: | 28-Feb-2006 |
| Appears in Collections: | DISSERTAÇÃO - Genética e Bioquímica |
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