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ORCID:  http://orcid.org/0000-0002-0941-3501
Document type: Dissertação
Access type: Acesso Aberto
Title: Caracterização bioquímica e funcional de uma nova Thrombin-like isolada da peçonha de Bothrops pauloensis
Author: Costa, Fábio Lucas Silva
First Advisor: Ávila, Veridiana de Melo Rodrigues
First coorientator: Brandeburgo, Maria Inês Homsi
Summary: Serinoproteases isoladas de peçonhas ofídicas têm um importante papel na formação e dissolução de coágulos. Essas toxinas principalmente, as enzimas thrombinlike afetam o sistema hemostático resultando em incoagulabilidade sanguínea. No presente estudo, uma enzima thrombin-like nomeada Tl-Bp foi isolada de Bothrops pauloensis e características bioquímicas, enzimáticas e farmacológicas foram determinadas. Tl-Bp é uma glicoproteína que contém ambos, carboidratos N-ligados e ácido siálico na estrutura, possui PM = 34 kDa sob condições redutoras e pI ~ 6,4. A seqüência N-terminal da enzima (VIGGDECDINEHPFL) mostrou alta similaridade quando comparada com outras toxinas thrombin-like isoladas de peçonhas ofídicas. Tl-Bp mostrou alta atividade coagulante sobre os plasmas bovino e humano e foi inibida por PMSF, benzamidina e leupeptina. Além disso, mostrou estabilidade quando examinadas em diferentes temperaturas (- 70°C a 37°C), pHs (3 a 9) e presença de íons metálicos divalentes (Ca2+, Mg2+, Zn2+ e Mn2+). Tl-Bp mostrou alta atividade catalítica sobre substratos naturais como o fibrinogênio e sintético, tais como o TAME, S-2238 e S-2288, além disso, mostrou atividade calicreína-like, mas foi incapaz de atuar sobre o S-2765 e substrato da plasmina. A enzima não demonstrou atividade hemorrágica, miotóxica, indução de edema e agregação plaquetária, assim como atividade proteolítica sobre a caseína. Analisados juntos, nossos resultados mostram que Tl-Bp é uma nova isoforma de enzima thrombin-like isolada da peçonha de Bothrops pauloensis.
Abstract: Serine proteinases isolated from snake venom have an important role in the formation and dissolution of clots. These toxins primarily, the thrombin-like enzymes affect the hemostatic system resulting in blood incoagulation. At present study, a thrombin-like enzyme named Tl-Bp was isolated from Bothrops pauloensis snake venom and its biochemical, enzymatic and pharmacological characteristics were determined. Tl-Bp is a glycoprotein that contain both carbohydrates N-linked and sialic acid in its structure, has Mr. = 34,000 at reducing conditions and pI ~ 6.4. The N-terminal sequence of the enzyme (VIGGDECDINEHPFL) showed high similarity when compared with other thrombin-like enzymes isolated from snake venoms. Tl-Bp showed high clotting activity upon bovine and human plasma and was inhibited by PMSF, benzamidine and leupeptin. Moreover, showed stability when examined at different temperatures (-70°C to 37°C), pHs (3 to 9) and presence of divalent metal ions (Ca2+, Mg2+, Zn2+ and Mn2+). Tl-Bp showed high catalytic activity upon natural substrates such as fibrinogen and synthetic, such as TAME, S-2238 and S-2288, moreover, showed kallikrein-like activity, but was unable to act upon S-2765 and plasmin substrate. The enzyme did not induce hemorrhage, myotoxicity, edema and platelet aggregation as well as proteolytic activity upon casein. Take together, our data show that Tl-Bp is a new thrombin-like enzyme isoform isolated from Bothrops pauloensis snake venom.
Keywords: Bothrops pauloensis
Peçonhas de serpentes
Coagulação
Atividade proteolítica
Enzimas thrombin-like
Snake venom
Blood coagulation
Proteolytic enzymes
Thrombin-like enzymes
Serpente peçonhenta - Peçonha
Bothrops
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
Language: por
Country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Institution Acronym: UFU
Department: Ciências Biológicas
Program: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
Quote: COSTA, Fábio Lucas Silva. Caracterização bioquímica e funcional de uma nova Thrombin-like isolada da peçonha de Bothrops pauloensis. 2008. 88 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2008.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15800
Date of defense: 28-Feb-2008
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Genética e Bioquímica

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