Please use this identifier to cite or link to this item: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/13125
Document type: Dissertação
Access type: Acesso Aberto
Title: Marcadores moleculares para competência ovocitária em células do Cumulus bovinas
Author: Kussano, Nayara Ribeiro
First Advisor: Franco, Maurício Machaim
First coorientator: Dode, Margot Alves Nunes
First member of the Committee: Macedo, Gustavo Guerino
Second member of the Committee: Milazzotto, Marcella Pecora
Summary: O presente estudo objetivou quantificar a expressão de genes candidatos em células do cumulus (CC) de ovócitos com alta e baixa capacidade de produzir embriões in vitro. Inicialmente, foi avaliado o efeito do sistema de cultivo individual e da biópsia na produção de embriões. Os complexos cumulus ovócitos (CCOs) foram distribuídos em três grupos: controle (CCOs cultivados em grupos); WOW (CCOs cultivados individualmente no sistema WOW); e microgota (CCOs cultivados individualmente em microgotas de 20 &#956;L). E, então foi comparada a produção de embriões do cultivo em grupo e do cultivo individual em microgota, com e sem biópsias. Foi quantificado o nível de transcritos dos genes GPC4, IGFBP4, FSHR, GHR, EGFR, FGF11, SLC2A1, SLC2A3, SPRY1, VCAN e KRT8, por PCR em tempo-real (qPCR) em biopsias de CC. As biópsias foram agrupadas de acordo com o resultado da produção de embriões individual em microgota, em: CCOs que formaram blastocisto em D7; CCOs que não clivaram e, CCOs que clivaram, mas que não chegaram a blastocisto. A produção de embriões em D7 foi inferior (P<0,05) nos grupos cultivados individualmente (WOW=17,9 % n=95; microgota= 26,3% n=95) do que no controle (45,0 %, n=209), entretanto a biópsia não afetou (P>0,05) a produção de blastocistos em nenhum dos grupos. Dos 11 genes avaliados nas CCs, três mostraram diferença no nível de RNAm. O GHR (p<0,10) e VCAN (P<0,10) tiveram maior expressão em CCs de ovócitos que chegaram a blastocistos comparado aos que não clivaram; já o GPC4 foi mais expresso (P=0,007) nas CCs dos que chegaram a embrião do que os que apenas clivaram. Conclui-se que a biópsia de CC não afeta a produção de embriões. A expressão dos genes GHR, VCAN e GPC4 em CC está associada a capacidade do ovócito de formar embrião e, pode ser utilizada como marcador não invasivo da competência ovocitária.
Abstract: The present study aimed to quantify the expression of candidate genes in cumulus cells (CC) from oocytes with high and low potential to develop in vitro up to the blastocyst stage. Initially, the effect of the individual culture system and the biopsy on embryo development was evaluated. Cumulus-oocyte-complexes (COCs) were distributed into 3 groups: control (COCs were cultured in groups); WOW (COCs were cultured individually in the WOW system); and micro droplet (COCs were individually cultured in micro droplet of 20 &#956;L). Then, embryo production was compared between the control and the individual system (micro droplet) in which the COCs were submitted or not to biopsy. Expression levels of GPC4, IGFBP4, FSHR, GHR, EGFR, FGF11, SLC2A1, SLC2A3, SPRY1, VCAN and KRT8 genes were quantified by real time PCR (qPCR) in CC biopsies. Each biopsied COC was individually tracked, by culturing them in a micro droplet, and categorized based on his fate: embryo at blastocyst stage at D7, cleaved and arrested and not cleaved. Average blastocyst rates were lower in individual culture (WOW=17,9 % n=95; microdrop= 26,3% n=95) than in the control group (45,0 %, n=209) (P<0.05), and no effect of the biopsy was observed for both groups (P>0.05). From the 11 genes evaluated 3 showed differential expressions. Higher expression of GHR (p<0.10) and VCAN (P<0.10) was observed in CCs that formed embryos than those not cleaved. The GPC4 gene was overexpressed (P=0,007) in CC from the formed embryos compared to cleaved and arrested ones. It can be concluded that biopsy do not affect embryo development. The expression of GHR, VCAN and GPC4 genes can be used as markers to distinguish COCs associated with good quality embryos from COCs with limited developmental potential.
Keywords: Competência ovocitária
Cultivo individual
Marcadores
Biopsy
Oocyte competence
Individual culture
Genes
Markers
Veterinária
Biopsia
Bovino - Criação
Genes
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA
Language: por
Country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Institution Acronym: UFU
Department: Ciências Agrárias
Program: Programa de Pós-graduação em Ciências Veterinárias
Quote: KUSSANO, Nayara Ribeiro. Marcadores moleculares para competência ovocitária em células do Cumulus bovinas. 2015. 86 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Agrárias) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2015.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/13125
Date of defense: 16-Mar-2015
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Ciências Veterinárias

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