Please use this identifier to cite or link to this item: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/12418
metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Caracterização bioquímica e funcional de uma Fosfolipase A2 isolada da peçonha de Bothrops alternatus
metadata.dc.creator: Paschoal, Tamires dos Santos
metadata.dc.contributor.advisor1: Oliveira, Fábio de
metadata.dc.contributor.advisor-co1: Mamede, Carla Cristine Neves
metadata.dc.contributor.referee1: Izidoro, Luiz Fernando Moreira
metadata.dc.contributor.referee2: Costa, Júnia de Oliveira
metadata.dc.description.resumo: As fosfolipases A2 pertencem a uma superfamília de proteínas com funções enzimáticas semelhantes, responsáveis pela hidrólise de fosfolipídeos e, assim, pela liberação de ácidos graxos e lisofosfolipídeos que participam de diversas atividades fisiológicas, como inflamação, ativação plaquetária, sinalização, proliferação e a migração celular. O presente trabalho teve como objetivo a caracterização bioquímica e funcional de uma fosfolipase A2 ácida isolada da peçonha de Bothrops alternatus, denominada BaG2P5. A proteína BaG2P5 foi purificada por meio de três passos cromatográficos em resinas de troca iônica (DEAESephacel), exclusão molecular (Sephadex G75) e interação hidrofóbica (Phenyl-Sepharose). A espectrometria de massas foi utilizada para determinação do grau de pureza e da massa molecular de BaG2P5, que foi de aproximadamente 14 kDa. BaG2P5 apresentou uma potente atividade fosfolipásica tempo e dose-dependentes, avaliada pelo método de hemólise radial em gel, e foi capaz de causar lesão do tecido muscular e recrutar leucócitos quando injetada intramuscularmente em camundongos. Além da miotoxicidade, BaG2P5 apresentou toxicidade in vitro sobre culturas de células da linhagem tumoral HeLa, e também efeito inibitório tempo e dose-dependentes sobre a agregação plaquetária induzida por epinefrina. Por outro lado, BaG2P5 não foi capaz de induzir a formação de edema nem a hiperalgesia quando injetada na região intraplantar da pata de ratos. Esses resultados contribuem para os estudos sobre a composição das peçonhas de serpentes e para melhor compreensão do papel das fosfolipases A2 nos envenenamentos ofídicos. Além disso, a caracterização de toxinas com efeitos antiplaquetário e antitumoral é uma etapa importante para a descoberta de novas moléculas com potencial terapêutico.
Abstract: The phospholipases A2 (PLA2s) are part of a superfamily of proteins with similar enzymatic functions, responsible for the hydrolysis of phospholipids and, thus, for the release of fatty acids and lysophospholipids which play a role in various physiological activities, like inflammation, platelet activation, signaling, cell proliferation and migration. The present study aimed at the functional and biochemical characterization of an acidic phospholipase A2 isolated from the Bothrops alternatus snake venom, named BaG2P5. BaG2P5 was purified using three chromatographic steps: ion exchange on DEAE-Sephacel, molecular exclusion in Sephadex-G75 and hydrophobic interactions in Phenyl-Sepharose. The mass spectrometry was used to determine the purity and the molecular mass of BaG2P5, which was approximately 14 kDa. The protein showed a potent time and dose-dependent phospholipasic activity, evaluated by indirect hemolysis method, and was able to cause muscle tissue damage and leukocyte recruitment when intramuscularly administered. In addition, BaG2P5 presented in vitro toxicity against HeLa cells, and inhibited platelet aggregation induced by epinephrine in a time and dose dependent manner. On the other hand, BaG2P5 could not induce intraplantar edema and hyperalgesia in rat paws. These results contribute for studies on snake venom composition and for better understanding of the role of phospholipases in snake envenoming. Furthermore, the characterization of toxins with anti-platelet and anti-cancer properties is an important step in the discovery of new molecules with therapeutic potential.
Keywords: Peçonha de serpente
Bothrops alternatus
Agregação plaquetária
Fosfolipases A2
Snake venom
Bothrops alternatus
Platelet aggregation
Phospholipases A2
Citologia
Bothrops
Fosfolipases
Serpente peçonhenta
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MORFOLOGIA::CITOLOGIA E BIOLOGIA CELULAR
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências Biomédicas
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas
Citation: PASCHOAL, Tamires dos Santos. Caracterização bioquímica e funcional de uma Fosfolipase A2 isolada da peçonha de Bothrops alternatus. 2015. 75 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biomédicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2015.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/12418
Issue Date: 30-Mar-2015
Appears in Collections:PPGBC - Mestrado em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas

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