Please use this identifier to cite or link to this item: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/12390
metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Alterações cromatínicas em espermatozoides de perus submetidos a dois níveis de proteína bruta na ração em três diferentes idades
metadata.dc.creator: Araújo, Daniel Santos
metadata.dc.contributor.advisor1: Beletti, Marcelo Emílio
metadata.dc.contributor.referee1: Arantes, Vânia Maria
metadata.dc.contributor.referee2: Moraes, Alberto da Silva
metadata.dc.description.resumo: O presente estudo objetivou avaliar a influência da idade e do teor proteico da ração sobre a incidência de alterações na compactação da cromatina espermática e sobre a morfometria da cabeça de espermatozoides de peru, bem como avaliar a influência destas alterações sobre a capacidade de fertilização dos espermatozoides e o desenvolvimento embrionário (eclosão). Foram utilizadas 120 amostras de sêmen de perus, distribuídas em 60 amostras no grupo A, aves que consumiram a ração P14 (14% de proteína bruta) e 60 no grupo B, aves que consumiram a ração P17 (17% de proteína bruta). As coletas de sêmen foram realizadas em três diferentes idades (37, 42 e 49 semanas), sendo coletadas 10 amostras de cada grupo em cada idade. As amostras foram submetidas à análise de imagem computacional de esfregaços de sêmen corados com azul de toluidina e por microscopia eletrônica de transmissão. Na análise computacional avaliaram-se as variáveis compactação e heterogeneidade da cromatina, área e perímetro da cabeça do espermatozoide. Na microscopia eletrônica observou-se alterações da cromatina classificadas em fraca, média e forte. Foram verificadas possíveis diferenças entre os grupos que receberam os dois tipos de ração e as diferentes idades avaliadas, assim como, a correlação entre as alterações cromatínicas e a taxa de fertilidade e eclosão dos ovos obtidos dos lotes de perus avaliados. O protocolo utilizado (pré-fixação com formol salina, esfregaço do sêmen em lâmina, secagem em temperatura ambiente, desnaturação pré-coloração com ácido clorídrico 1N, coloração com azul de toluidina pH 4,0 em cubeta de vidro, desidratação em série de concentrações crescentes de álcool, diafanização com xilol e montagem com bálsamo do Canadá) foi eficiente para a observação visual, porém para a análise computacional da compactação da cromatina em espermatozoides de peru utilizando captura de imagens digitais, necessita de novas adaptações e padronizações. Os resultados demonstraram que a análise computacional de esfregaços de sêmen corados com azul de toluidina ainda não foi confiável para analisar de alterações cromatínicas de peru. As análises morfométricas demonstraram que as cabeças de espermatozoides de perus jovens possuem área maior em comparação com perus de meia idade e perus velhos e que o perímetro da cabeça é uma variável importante na avaliação da fertilidade de perus. Os resultados obtidos na microscopia eletrônica de transmissão demonstraram que esta técnica é eficiente na avaliação de alteração da compactação da cromatina em espermatozoides de peru, podendo ser utilizada como técnica de avaliação de fertilidade em perus. A existência de correlação negativa entre alterações cromatínicas espermática e fertilidade, e mais intensamente com eclosão, permite concluir que estas alterações prejudicam a fertilidade do peru, influenciando no processo de fertilização e na evolução embrionária, além que ração com teor de 17% de proteína bruta afeta negativamente nas taxas de fertilidade e eclosão, onde a partir de 42 semanas de idade os perus passam apresentar mais alterações na estrutura cromatínica.
Abstract: The present study aimed to evaluate the influence of age and protein level in the diet on the incidence of changes in condensation chromatin sperm of turkey, and also to evaluate the influence of these changes on the fertilizing capacity of sperm and embryonic development (hatching). Were used a total of 60 samples of semen turkeys, divided into 30 samples in group A: males fed diet P14 (14% protein) and 30 in group B: males fed diet P17 (17% protein). The semen was collected in the same flock when males had three different ages (37, 42 and 49 weeks) and collected 10 samples from each group at each age. All samples were divided in two aliquots which were stored at two different fixing solutions. For computer analysis of sperm chromatin condensation, one drop of semen was placed in 2 ml of formolcitrato solutions. For analysis by transmission electron microscopy, another drop of semen was placed in 2 ml of Karnovsky solution (2.5% glutaraldehyde, 2% paraformoldehyde; sodium phosphate buffer 0.1 M, pH 7.2). For staining was following the protocol that Rodrigues et al (2009) using staining with toluidine blue. Denaturation pre-staining with 1N hydrochloric acid for 10 minutes after completion of the semen smears on slides and dried at room temperature. The solution used for staining of toluidine blue in 0.025% pH4 in cuvettes for 20 minutes with subsequent dehydration in a series of increasing alcohol concentrations, cleared with xylene and assembly with Canada balsam oil. Digital images were captured, segmented to several heads of spermatozoa per program developed and evaluated in SCILAB:, perimeter, length, width, intensity and heterogeneity of chromatin compaction was used as the default value of the chromatin compaction bottom quartile of mean values the gray level of the heads analyzed in a single blade. Electron microscopy was used and the samples after processing were evaluated heads 100 of each sperm sample. The heads were classified by level of chromatin descompaction: normal, weak, medium and strong. The eggs were incubated and fertility rates and hatching were calculated. The staining protocol used allowed visual observation morphological changes, but the computational analysis was not considered reliable for lack of repeatability in the production of images and electron microscopy was considered very efficient and can be used as a technique for evaluating fertility in turkeys. The chromatin alterations observed by electron microscopy detracted fertility of turkey and hatching, because act in embryonic development. Beyond that feed content with 17% crude protein negatively affects fertility rates and hatching, where from 42-week-old turkeys are present more changes in chromatin structure.
Keywords: Cromatina
Espermatozoides
Perus
Chromatin
Fertility
Protein
Sperm
Turkeys
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MORFOLOGIA::CITOLOGIA E BIOLOGIA CELULAR
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências Biomédicas
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas
Citation: ARAÚJO, Daniel Santos. Alterações cromatínicas em espermatozoides de perus submetidos a dois níveis de proteína bruta na ração em três diferentes idades. 2013. 52 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biomédicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2013.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/12390
Issue Date: 25-Mar-2013
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Biologia Celular e Estrutural Aplicadas

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Daniel Santos.pdf368.95 kBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.