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Document type: Dissertação
Access type: Acesso Aberto
Title: Proteína αKlotho: da associação in vitro com o ERβ ao perfil antitumoral no soro de pacientes com câncer de mama
Alternate title (s): αKlotho: from the in vitro association with ERβ to the antitumor profile in serum samples of breast cancer patients
Author: Amaral, Pedro Augusto do
First Advisor: Silva, Marcelo José Barbosa
First member of the Committee: Ferreira Júnior, Alvaro
Second member of the Committee: Amaral, Anna Beatriz Costa Neves do
Summary: αKlotho é uma proteína de antisenescência celular, a qual está relacionada a ações antitumorais, regulando o crescimento, a proliferação e a invasividade em diversos tipos de tumores, incluindo o câncer de mama. O diagnóstico e prognóstico do câncer de mama são baseados em características intrínsecas do tumor, como a presença de receptores estrogênicos, especialmente o ERα. Por sua vez, o ERβ apesar de demonstrar ações antitumorais, permanece com papel incerto na carcinogênese da mama e seu uso clínico é limitado. O objetivo do estudo foi analisar a relação entre αKlotho e os receptores de estrogênio, bem como avaliar os níveis séricos desta proteína em pacientes com câncer de mama de acordo com características histopatológicas e imunohistoquímicas do tumor. As linhagens luminal e triplo-negativa de câncer de mama MCF-7 e MDA MB-231 foram cultivadas e expostas aos agonistas dos ER, E2 e DPN, para determinação da expressão de αKlotho, posteriormente foram realizados ensaios de proliferação e de avaliação da EMT nas células MCF-7 tratadas com os mesmos agonistas. Para os ensaios de αKlotho solúvel, amostras de soro de 75 pacientes com câncer de mama e 63 controles saudáveis foram randomizadas e os níveis séricos foram avaliados por ELISA sanduíche. Dados clínicos e diagnósticos foram obtidos dos prontuários e bases de dados do hospital. Nas células MCF-7 houve um aumento considerável na expressão de αKlotho após estímulo do ERβ com DPN (p<0,01). A ativação do ERβ também levou à diminuição da proliferação e parada do ciclo celular, bem como a inibição da transição epitélio-mesênquima (EMT). Nas análises de soro, mulheres saudáveis apresentaram níveis maiores de αKlotho solúvel do que pacientes (p=0,04). Dentre as pacientes, aquelas com tumor inicial (p=0,02), positivos para ER (p=0,03), de subtipo luminal (p=0,04) apresentaram níveis séricos mais elevados de αKlotho solúvel. Além disso, a produção de αKlotho em baixos ou altos níveis (p=0,04 e p=0,03) foi associada a maiores taxas de proliferação por Ki67. Por fim, pacientes com ausência de metástase linfonodal também apresentaram maiores níveis de αKlotho (p=0,03). Esses dados sugerem que αKlotho solúvel foi relacionado a fatores de melhor prognóstico no câncer de mama, e confirmam a relação entre αKlotho e o ERβ com a regulação positiva da expressão de αKlotho por parte deste receptor e seu perfil antitumoral em linhagem luminal de mama.
Abstract: αKlotho, a cellular anti-senescence protein, is related to antitumor actions, regulating the growth, proliferation and invasiveness in several types of tumors, including breast cancer. The diagnosis and prognosis of breast cancer are based on intrinsic characteristics of the tumor, such as the presence of estrogen receptors, especially ERα. In turn, ERβ despite demonstrating antitumor actions, remains with an uncertain role in breast carcinogenesis and its clinical use is limited. The aim of the study was to analyze the relationship between αKlotho and estrogen receptors, as well as to evaluate the serum levels of this protein in patients with breast cancer according to histopathological and immunohistochemical characteristics of the tumor. The luminal and triple-negative lineages of breast cancer, MCF-7 and MDA MB-231, were cultured and exposed to the agonists of ER, E2 and DPN, to determine the expression of αKlotho, then proliferation and EMT evaluation trials were performed on MCF-7 cells treated with the same agonists. For the soluble αKlotho assays, serum samples from 75 breast cancer patients and 63 healthy controls were randomized and serum levels were assessed by sandwich ELISA. Clinical and diagnostic data were obtained from hospital records and databases. In MCF-7 cells there was a considerable increase in αKlotho expression after stimulation of ERβ with PND (p<0.01). Activation of ERβ also led to decreased proliferation and cell cycle arrest, as well as inhibition of the epithelial-mesenchymal transition (EMT). In serum analyzes, healthy women had higher levels of soluble αKlotho than patients (p=0.04). Among the patients, those with initial tumor (p=0.02), ER positivity (p=0.03), and luminal subtype (p=0.04) had higher serum levels of soluble αKlotho. Furthermore, αKlotho production in low or high levels (p=0.04 and p=0.03) was associated with higher rates of proliferation by Ki67. Finally, patients with no lymph node metastasis also had higher levels of α Klotho (p=0.03). These data suggest that soluble αKlotho was related to factors of better prognosis in breast cancer and confirm the relationship between αKlotho and ERβ with the positive regulation of αKlotho expression by this receptor and its antitumor profile in breast lumen.
Keywords: αKlotho
Receptor de estrogênio beta
Câncer de mama
Biomarcador
Estrogen receptor beta
Breast cancer
Biomarker
Imunologia
Mamas - Câncer
Biomarcadores tumorais
Receptor beta de estrogênio
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOGENETICA
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Program: Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
Quote: AMARAL, Pedro Augusto do. Proteína αKlotho: da associação in vitro com o ERβ ao perfil antitumoral no soro de pacientes com câncer de mama. 2018. 62 f. Dissertação (Mestrado em Imunologia e Parasitologia Aplicadas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2018. Disponível em: http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2018.790.
Document identifier: http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2018.790
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/21880
Date of defense: 29-May-2018
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