Publicação: Métodos alternativos para análise de cromatina espermática de garanhões
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CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS
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A cromatina espermática, composta por DNA e proteínas nucleares compactadas, assegura a
estabilidade genômica. A importância da integridade do DNA espermático estende-se ao
desenvolvimento embrionário, visto que falhas na compactação ou na incorporação adequada
de proteínas nucleares levam à fragmentação do DNA e podem resultar em abortos ou falhas
no desenvolvimento fetal. Animais que apresentam motilidade e morfologia espermática
normais podem, ainda assim, apresentar danos no DNA. Embora o Ensaio de Estrutura da
Cromatina Espermática (SCSA) seja considerado o método padrão para essa avaliação, sua
aplicação é limitada pelo alto custo e pela necessidade de citometria de fluxo, o que justifica a
investigação de métodos alternativos. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivo
avaliar a possível associação entre alterações na compactação e estabilidade do DNA
espermático, identificadas por testes de coloração com laranja de acridina (LA), azul de
toluidina (AT), reação de Feulgen (RF) e a concepção de éguas inseminadas. Foram analisadas
noventa e sete amostras de sêmen resfriado de garanhões das raças Quarto de Milha e
Mangalarga Marchador, coletadas entre agosto de 2023 e dezembro de 2025, todas previamente
aprovadas por avaliação convencional de sêmen. A avaliação incluiu análise visual em
microscopia de fluorescência para LA. Para os testes com AT e RF, foi realizada análise
computacional das imagens obtidas por microscopia de luz transmitida dos esfregaços corados.
Nessas análises foram identificados padrões regionais de descompactação da cromatina, a
heterogeneidade e a diferença percentual de descompactação da cromatina. A concepção foi
verificada por ultrassonografia quinze dias após a ovulação das éguas inseminadas. Os
resultados demonstraram ausência de correlação estatisticamente significativa entre a maioria
das variáveis de integridade da cromatina e a concepção, independentemente do teste utilizado.
Apenas as categorias de descompactação base-ápice e descompactação total apresentaram
correlação negativa moderada com a concepção em alguns testes, sugerindo que alterações
cromatínicas mais extensas possam ter maior potencial de impacto biológico. No entanto, de
forma geral, as alterações detectadas mostraram-se de baixa magnitude e possivelmente abaixo
do limiar necessário para comprometer a fertilização inicial. Conclui-se que a avaliação da
cromatina espermática pelos métodos alternativos em esfregaço de sêmen pode ser utilizada
como ferramenta complementar à análise seminal convencional, e não como marcador isolado
de fertilidade em garanhões.
Abstract
Sperm chromatin, composed of DNA and compacted nuclear proteins, ensures genomic
stability. The importance of sperm DNA integrity extends to embryonic development, as
failures in compaction or proper incorporation of nuclear proteins lead to DNA fragmentation
and can result in miscarriages or fetal development failures. Animals with normal sperm
motility and morphology may still have DNA damage. Although the Sperm Chromatin
Structure Assay (SCSA) is considered the standard method for this assessment, its application
is limited by high cost and the need for flow cytometry, which justifies the investigation of
alternative methods. In this context, the present study aimed to evaluate the possible association
between changes in sperm DNA compaction and stability, identified by staining tests with
acridine orange (AO), toluidine blue (TB), and Feulgen reaction (FR), and the conception of
inseminated mares. Ninety-seven cooled semen samples from Quarter Horse and Mangalarga
Marchador stallions were analyzed, collected between August 2023 and December 2025, all
previously approved by conventional semen evaluation. The evaluation included visual analysis
under fluorescence microscopy for AO. For the TB and FR tests, computational analysis was
performed on images obtained by transmitted light microscopy of stained smears. These
analyses identified regional patterns of chromatin decompaction, heterogeneity, and the
percentage difference in chromatin decompaction. Conception was verified by ultrasound
fifteen days after ovulation in inseminated mares. The results showed no statistically significant
correlation between most chromatin integrity variables and conception, regardless of the test
used. Only the categories of base-apex decompaction and total decompaction showed a
moderate negative correlation with conception in some tests, suggesting that more extensive
chromatin changes may have greater potential for biological impact. However, in general, the
changes detected were of low magnitude and possibly below the threshold necessary to
compromise initial fertilization. It is concluded that sperm chromatin evaluation by alternative
methods in semen smears can be used as a complementary tool to conventional semen analysis
and should not be considered an isolated marker of fertility in stallions.
Palavras-chave
concepção, conception, DNA, equino, espermatozoide, equine, spermatozoon
Citação
ISIDORO, Delfim Nayara. Métodos alternativos para análise de cromatina espermática de garanhões. 2026. 30 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Medicina Veterinária) – Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2026.
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