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ORCID:  http://orcid.org/0009-0000-5758-3030
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acceso: Acesso Embargado
Fecha de embargo: 2026-07-31
Título: Avaliação in vitro dos efeitos antiparasitário, antitumoral e antimicrobiano de proteínas extraídas e purificadas de semente de Cycas revoluta
Título (s) alternativo (s): In vitro evaluation of the antiparasitic, antitumor and antimicrobial effects of proteins extracted and purified from Cycas revoluta seeds
Autor: Gardenghi, Carolina de Souza
Primer orientador: Santiago, Fernanda Maria
Primer miembro de la banca: Cunha Júnior, Jair Pereira da
Segundo miembro de la banca: Franco, Rodrigo Rodrigues
Resumen: Cycas revoluta (Thunb.), pertencente à família Cycadaceae é uma gimnosperma nativa da China, é conhecida por seu grande apelo ornamental. Recentemente, a comunidade científica tem investigado seu potencial terapêutico contra uma variedade de patógenos. Este estudo foca na análise das proteínas presentes em suas sementes, com o objetivo de fornecer informações sobre as atividades biológicas dessas proteínas, com destaque para suas propriedades antiparasitárias, antitumorais e antimicrobianas. Primeiramente, a extração de proteínas das sementes de C. revoluta foi realizada por maceração e homogeinização com NaCl, seguida da purificação proteica em coluna de gel filtração Sephadex G-75. As proteínas foram então visualizadas por meio de eletroforese em SDS-Page, quantificadas pelo método BCA e analisadas por espectrometria de massa. Antes de realizar as atividades biológicas, foram feitos testes para avaliar a citotoxicidade das amostras, garantindo que dosagens seguras fossem usadas para células não tumorais e evitando possíveis vieses no estudo. O estudo inclui testes para avaliar o efeito antiparasitário, analisando a invasão e proliferação dos taquizoítos de Toxoplasma gondii. Além disso, avalia o efeito antitumoral em câncer de pulmão e próstata, com experimentos focados tanto no tratamento direto das células (MTT) quanto na prevenção (formação de colônias tumorais). Também são realizados testes para investigar a atividade antimicrobiana, determinando a dose mínima capaz de inibir o crescimento de Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Salmonella enterica. O extrato bruto das sementes de Cycas revoluta e as quatro frações proteicas purificadas, denominadas Pico I (Proteína de fusão multifuncional - Glicina-tRNA sintetase – 113,7 kDa; Prostaglandina G/H sintase – 63,5 kDa; Quitinase A – 38,7 kDa), Pico II (Quitinase A – 38,7 kDa), Pico Associado (Quitinase A – 38,7 kDa; Hidrolase – 15,4 kDa), and Pico III (Hidrolase – 15,4 kDa), foram investigadas. Cada fração proteica apresentou resultados distintos em análise biológica. Na avaliação da atividade anti-Toxoplasma gondii, o Pico II foi particularmente notável por sua eficácia no tratamento do parasita e das células infectadas. No ensaio antitumoral, a análise MTT revelou que apenas o extrato bruto reduziu a viabilidade das células de câncer de próstata. No ensaio clonogênico, tanto o extrato bruto quanto o Pico Associado foram eficazes na redução da formação de colônias em células de câncer de próstata (PC3) e de pulmão (A549). Na avaliação antibacteriana, as frações com os menores valores de MIC foram o Pico III para Escherichia coli e Staphylococcus aureus, e o Pico II para Salmonella enterica. Em conclusão, as frações proteicas purificadas da C. revoluta apresentam um potencial terapêutico promissor. Novos estudos científicos sobre essa espécie são incentivados na busca de novas moléculas terapêuticas com grande potencial de aplicação.
Abstract: Cycas revoluta (Thunb.), belonging to the Cycadaceae family, is a gymnosperm native to China, known for its significant ornamental appeal. Recently, the scientific community has been investigating its therapeutic potential against a variety of pathogens. This study focuses on analyzing the proteins present in its seeds, aiming to provide insights into their biological activities, particularly their antiparasitic, antitumor, and antimicrobial properties. Firstly, protein extraction from C. revoluta seeds was performed by maceration and homogenization with NaCl, followed by protein purification using a Sephadex G-75 gel filtration column. The proteins were then visualized via SDS-PAGE gel electrophoresis, quantified using the BCA method, and analyzed by mass spectrometry. Before assessing biological activities, cytotoxicity tests were conducted to ensure that safe dosages were used for non-tumor cells, thereby avoiding potential biases in the study. The study includes tests to evaluate the antiparasitic effect by analyzing the invasion and proliferation of Toxoplasma gondii tachyzoites. Additionally, it assesses the antitumor effect on lung and prostate cancer, with experiments focused on both direct treatment of cells (MTT) and prevention (tumor colony formation). Antimicrobial activity tests were also conducted to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) required to inhibit the growth of Escherichia coli, Staphylococcus aureus, and Salmonella enterica. The crude extract from Cycas revoluta seeds and the four purified protein fractions, designated as Peak I (Multifunctional fusion protein - Glycine-tRNA synthetase – 113,7 kDa; Prostaglandin G/H synthase – 63,5 kDa; Chitinase A – 38,7 kDa), Peak II (Chitinase A – 38,7 kDa), Associated Peak (Chitinase A – 38,7 kDa; Hydrolase – 15,4 kDa), and Peak III (Hydrolase – 15,4 kDa), were investigated. Each protein fraction exhibited distinct results in biological analysis. In the evaluation of anti-Toxoplasma gondii activity, Peak II was particularly notable for its efficacy in treating the parasite and infected cells. In the antitumor assay, the MTT analysis revealed that only the crude extract reduced the viability of prostate cancer cells. In the clonogenic assay, both the crude extract and the Associated Peak effectively reduced colony formation in prostate (PC3) and lung (A549) cancer cells. In the antibacterial evaluation, the fractions with the lowest MIC values were Peak III for Escherichia coli and Staphylococcus aureus, and Peak II for Salmonella enterica. In conclusion, the purified protein fractions of C. revoluta exhibit promising therapeutic potential. Further scientific studies on this species are encouraged in the search for new therapeutic molecules with significant application potential.
Palabras clave: Cycas revoluta,
biological activity
atividade biológica,
frações proteicas.
sementes,
seeds
protein fractions
Área (s) del CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA
Tema: Imunologia
Câncer - Epidemiologia
Moléculas
Gimnosperma
Idioma: por
País: Brasil
Editora: Universidade Federal de Uberlândia
Programa: Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
Cita: GARDENGHI, Carolina de Souza. Avaliação in vitro dos efeitos antiparasitário, antitumoral e antimicrobiano de proteínas extraídas e purificadas de semente de Cycas revoluta. 2024. 77 f. Dissertação (Mestrado em Imunologia e Parasitologia) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2024. DOI http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2024.481
Identificador del documento: http://doi.org/10.14393/ufu.di.2024.481
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/44249
Fecha de defensa: 31-jul-2024
Objetivos de Desarrollo Sostenible (ODS): ODS::ODS 3. Saúde e bem-estar - Assegurar uma vida saudável e promover o bem-estar para todos, em todas as idades.
Aparece en las colecciones:DISSERTAÇÃO - Imunologia e Parasitologia Aplicadas

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