Publicação: Própolis vermelha brasileira: ação antibacteriana contra patógenos endodônticos e avaliação in vitro da produção de radicais livres
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CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::ODONTOLOGIA::ODONTOPEDIATRIA, CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::ODONTOLOGIA::ENDODONTIA, CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MORFOLOGIA::CITOLOGIA E BIOLOGIA CELULAR
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Silva, Marcelo José Barbosa
Resumo
A manutenção da vitalidade pulpar é o principal objetivo das terapias pulpares vitais (TPV) e a seleção de um bom material irá contribuir para a longevidade do tratamento. A própolis vermelha brasileira é um excelente agente antimicrobiano e poderia ser utilizada como agente terapêutico em terapias pulpares. O presente estudo analisou a ação antibacteriana do extrato bruto da própolis vermelha Brasileira (PVB) e o seu efeito em contato direto com fibroblastos humanos da polpa dentária (FHPD), em comparação ao material padrão-ouro para terapias vitais pulpares: o Agregado Trióxido Mineral (MTA). A Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Bactericida Mínima da PVB foi determinada contra patógenos endodônticos anaeróbios. Os FHPD foram semeados em placas de 96 poços e colocados em contato, após 24h do plaqueamento, com PVB10 (10 μg/mL), PVB50 (50 μg/mL), MTA em diferentes diluições (1:1, 1:2, 1:4 e 1:8), dimetilsulfóxido a 0,5% (DMSO 0,5%) e meio de cultura (DMEM). Após 24h da exposição aos materiais, os grupos foram submetidos ao ensaio de viabilidade celular (MTT formazan) e produção de radicais livres (espécies reativas de oxigênio – EROS, sonda fluorescente 2,7-diclorodihidrofluoresceína-diacetato (DCFH-DA) e óxido nítrico - NO, reação de Griess). Os testes ANOVA One way e Tukey foram realizados considerando um nível de significância de 5%. Os valores de CIM/CBM para a PVB demonstraram ação antibacteriana para a maioria das bactérias testadas: P. micra (6,25/6,25 µg/mL), F. nucleatum (25/25 µg/mL) P. nigrescens (50/100 µg/mL), P. melaninogenica (50/100 µg/mL), P. intermedia (50/100 µg/mL) e P. gingivalis (50 µg/mL). Tanto o MTA quanto a PVB estimularam a viabilidade celular, destacando-se a PVB10 e o MTA 1:8 (p=0.007 e p=0.001, respectivamente). Em relação à produção de EROS e ON, foi observado que os grupos MTA 1:1, MTA 1:2 e PVB50 elevaram sutilmente a produção de EROS (p<,001) e ON (p=0.008, p=0.007 e p<.001, respectivamente) comparado ao grupo DMEM. Por outro lado, a PVB10 manteve os níveis de produção de EROS (p=0,976) e ON (p=0,974) semelhantes ao grupo DMEM. Portanto, a PVB se mostrou como um relevante agente antibacteriano para bactérias anaeróbias relacionadas à infecção endodôntica primária e, além disso, tanto o MTA quanto a PVB foram capazes de estimular a viabilidade dos FHPD sem aumentar consideravelmente a produção dos níveis de ON e EROS.
Abstract
Maintenance of pulp vitality is one of the purposes of vital pulp therapies (VPT) and selection of a good material strongly affects the long-term outcomes. Brazilian red propolis (BRP) is a great antimicrobial agent and may provide therapeutic solutions for pulp therapy. We hypothesized that BRP could show promising antibacterial activity and perform similar behavior with Mineral Trioxide Aggregate (MTA) in free radicals production and cell viability findings. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) of BRP was determined against anaerobic endodontic pathogens. Human dental pulp fibroblasts (HDPFs) were seeded in 96 well-plates and exposed, after 24h, to BRP10 (10 μg/mL), BRP50 (50μg/mL), MTA extracts (1:1, 1:2, 1:4 e 1:8), dimethyl sulfoxide 0,5 % (DMSO) and cell culture medium (DMEM). Subsequently, 24h after the exposure to materials, the groups were tested for cell viability (MTT formazan assay), and free radicals production (reactive oxygen species - ROS, 2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate fluorescent probe (DCFHDA) and nitric oxide – NO, Griess reagent). The One-way ANOVA and Tukey’s tests were employed considering significance level of 5%. MIC/MBC values of BRP performing antibacterial activity for P. micra (6.25/6.25 μg/mL), F. nucleatum (25/25 μg/mL), P. melaninogenica (50/100 μg/mL), P. nigrescens (50/100 μg/mL), P. intermedia (50/100 μg/mL) and P. gingivalis (50/200 μg/mL). In our cell viability findings, BRP and MTA were able to stimulate cell viability, emphasizing BRP10 and MTA 1:8 (p=0.007 and p=0.001, respectively). Furthermore, it was observed that MTA 1:1, MTA 1:2 and BRP50 slightly increased ROS (p<.001) and NO production (p=0.008, p=0.007 and p<.001 respectively) compared to DMEM group. On the other
hand, BRP10 did not raised the amount of ROS (p=0.976) and NO (p=0.974) production compared to DMEM. Therefore, BRP presented high antibacterial activity for anaerobic bacteria involved in primary endodontic infection and, both BRP and MTA promoted the viability of HDPFs without greatly increased NO and ROS production.
Palavras-chave
Própolis, Propolis, Radicais livres, Free radicals, Agente Antibacteriano, Antibacterial Agent, Odontologia
Citação
OLIVEIRA NETO, Nilson Ferreira de. Própolis vermelha brasileira: ação antibacteriana contra patógenos endodônticos e avaliação in vitro da produção de radicais livres. 2021. 38 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2021. DOI http://doi.org/10.14393/ufu.di.2021.549
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