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https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/32796
ORCID: | ![]() |
Document type: | Tese |
Access type: | Acesso Aberto |
Embargo Date: | 2023-09-22 |
Title: | Efeitos do tratamento intradérmico com a jararagina-C, uma proteína tipo-disintegrina isolada da peçonha de Bothrops jararaca, sobre a cicatrização de feridas cutâneas em camundongos |
Alternate title (s): | Effects of intradermal treatment with jararagin-C, a disintegrin-like protein isolated from Bothrops jararaca venom, on skin wound healing in mice |
Author: | Ferreira, Bruno Antonio |
First Advisor: | Araújo, Fernanda de Assis |
First coorientator: | Clissa, Patrícia Bianca |
First member of the Committee: | Goulart Filho, Luiz Ricardo |
Second member of the Committee: | Silva, Flávio Henrique da |
Third member of the Committee: | Barcelos, Luciola da Silva |
Fourth member of the Committee: | Azevedo, Fernanda Van Petten de Vasconcelos |
Summary: | Neste trabalho foi avaliado o efeito da administração intradérmica da jararagina-C, uma proteína tipo-disintegrina, isolada da peçonha de B. jararaca e com afinidade pela integrina α2β1, durante a cicatrização de feridas excisionais. Quatro lesões foram performadas na região dorsal de camundongos da linhagem Swiss, com o auxílio de um punch de biópsia cirúrgico de 5 mm. Os animais foram distribuídos em dois grupos experimentais, cujos indivíduos foram diariamente tratados com injeções de 10 µl de PBS (grupo controle) ou da toxina (200 ng), aplicados nas bordas da ferida. Dez animais, de cada um dos grupos experimentais, foram eutanasiados nos seguintes intervalos de tempo 1, 3, 7, 10 e 14 dias após a indução das lesões (totalizando 20 animais para cada intervalo). Após a eutanásia, as feridas e a pele do seu entorno foram removidas com o auxílio de um punch de biópsia de 8 mm, pesadas e processadas para análises bioquímicas, histológicas e de biologia molecular. As feridas tratadas com a jararagina-C apresentaram uma taxa de fechamento mais acelerada, acompanhada de uma rápida resolução da resposta inflamatória, com redução do infiltrado de neutrófilos, dos níveis de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α, CXCL-1 e CCL2/JE/MCP-1) e um acúmulo de macrófagos nos tecidos analisados. Observou-se também, nas lesões tratadas com esta proteína, uma maior expressão de genes associados ao fenótipo de macrófagos alternativamente ativados (M2), responsáveis pela resolução da resposta inflamatória e pela secreção de vários mediadores associados com as etapas subsequentes do reparo. Concomitantemente, a administração da toxina foi capaz de incitar a angiogênese nas feridas, elevando o conteúdo de hemoglobina, a densidade de novos vasos sanguíneos e a síntese de citocinas pró-angiogênicas (VEGF e FGF). Por fim, nas feridas dos grupos tratados, observamos ainda um aumento da deposição de colágeno nas feridas, acompanhado de níveis mais elevados da citocina pró-fibrogênica TGF-β1. Além disso, ao avaliarmos a organização e a maturação da matriz, por meio da diferenciação entre fibras de colágeno do tipo I e fibras de colágeno do tipo III, observamos que o tratamento com a jararagina-C, resultou em uma deposição precoce e mais elevada de fibras de colágeno do tipo I. Em conjunto, os dados sugerem que a administração da jararagina-C acelerou o fechamento das feridas excisionais, por meio da modulação de respostas importantes ao processo de cicatrização de feridas (ex.: inflamação, angiogênese e fibrogênese). Desta forma, este trabalho não só contribui para a elucidação dos efeitos ocasionados pela administração da jararagina-C, como também, para o aprofundamento do conhecimento sobre a sinalização mediada pela integrina α2β1 nos processos avaliados, permitindo o desenvolvimento de novas terapias para o tratamento de feridas cutâneas. |
Abstract: | In this work, the effect of intradermal administration of jararhagin-C, a disintegrin-type protein, isolated from B. jararaca venom and with affinity for α2β1 integrin, was evaluated during the healing of excisional wounds. Four lesions were performed on the dorsal region of Swiss strain mice, with the aid of a 5 mm surgical biopsy punch. The animals were divided into two experimental groups, whose subjects were daily treated with injections of 10 µl of PBS (control group) or of the toxin (200 ng), applied to the edges of the wound. Ten animals from each of the experimental groups, were euthanized at the following time intervals 1, 3, 7, 10 and 14 days after lesion induction (totaling 20 animals for each interval). After euthanasia, the wounds and skin around them were removed with the aid of an 8 mm biopsy punch, weighed and processed for biochemical, histological and molecular biology analysis. Wounds treated with jararhagin-C showed a faster rate of closure, accompanied by a rapid resolution of the inflammatory response, with a reduction in neutrophil infiltrate, levels of pro-inflammatory cytokines (TNF-α, CXCL-1 and CCL2 / JE / MCP-1) and an accumulation of macrophages in the analyzed tissues. It was also observed, in the lesions treated with this protein, a greater expression of genes associated with the phenotype of alternatively activated macrophages (M2), responsible for the resolution of the inflammatory response and for the secretion of several mediators associated with the subsequent stages of repair. Concomitantly, the administration of the toxin was able to incite angiogenesis in the wounds, increasing the hemoglobin content, the density of new blood vessels and the synthesis of pro-angiogenic cytokines (VEGF and FGF). Finally, in the wounds of the treated groups, we also observed an increase in the collagen deposition in the wounds, accompanied by higher levels of the pro-fibrogenic cytokine TGF-β1. In addition, when evaluating the organization and maturation of the matrix, by differentiating between type I collagen fibers and type III collagen fibers, we observed that treatment with jararhagin-C resulted in an early and higher deposition of type I collagen fibers. Considering everything, the data suggest that the administration of jararhagin-C accelerated the closure of excisional wounds by modulating important responses to the wound healing process (e.g., inflammation, angiogenesis and fibrogenesis). Thus, this work not only contributes to the elucidation of the effects caused by the administration of jararhagin-C, but also to the deepening of knowledge about the signaling mediated by the integrin α2β1 in the evaluated processes, allowing the development of new therapies for the treatment of skin wounds. |
Keywords: | Cicatrização Healing Feridas cutâneas Skin wounds Disintegrinas Disintegrins Jararagina Jararhagin Integrinas Integrins Peçonha Venom |
Area (s) of CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::QUIMICA DE MACROMOLECULAS |
Subject: | Genética |
Language: | por |
Country: | Brasil |
Publisher: | Universidade Federal de Uberlândia |
Program: | Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica |
Quote: | FERREIRA, Bruno Antonio. Efeitos do tratamento intradérmico com a jararagina-C, uma proteína tipo-disintegrina isolada da peçonha de Bothrops jararaca, sobre a cicatrização de feridas cutâneas em camundongos. 2020. 89 f. Tese (Doutorado em Genética e Bioquímica) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2020. DOI http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2021.5542. |
Document identifier: | https://doi.org/10.14393/ufu.te.2021.5542 |
URI: | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/32796 |
Date of defense: | 16-Dec-2020 |
Appears in Collections: | TESE - Genética e Bioquímica |
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