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ORCID:  http://orcid.org/0000-0003-3616-6611
Document type: Tese
Access type: Acesso Aberto
Title: Compostos fenólicos da casca dos frutos de Annona crassiflora com propriedades antinociceptivas, anti-inflamatórias e antioxidantes em modelos in vitro e in vivo
Alternate title (s): Phenolic compounds infrom Annona crassiflora fruit peel with antinociceptive, anti-inflammatory and antioxidant properties in in vitro and in vivo models
Author: Justino, Allisson Benatti
First Advisor: Espindola, Foued Salmen
First coorientator: Silva, Cássia Regina
First member of the Committee: Langassner, Silvana Maria Zucolotto
Second member of the Committee: Oliveira, Sara Marchesan de
Third member of the Committee: Filho, Luiz Ricardo Goulart
Fourth member of the Committee: Lotufo, Celina Monteiro
Summary: A casca do fruto de Annona crassiflora Mart., uma espécie nativa do Cerrado brasileiro, é uma fonte de compostos fenólicos com alta capacidade antioxidante. Este estudo teve como objetivo investigar as possíveis propriedades antinociceptivas, anti-inflamatórias e antioxidantes de frações ricas em polifenóis da casca dos frutos de A. crassiflora em modelos in vitro e in vivo. Citocinas pró-inflamatórias e a produção de óxido nítrico (NO) foram avaliadas em macrófagos ativados por LPS. A fração acetato de etila, por ser capaz de reduzir a produção de mediadores inflamatórios nos macrófagos, foi administrada por via oral em camundongos C57BL/6/J, e os animais foram submetidos à nocicepção induzida por glutamato, à inflamação induzida por adjuvante de Freund completo (CFA), e a testes de campo aberto e rotarod para análise do desempenho motor. A fração n-butanol, por apresentar a maior capacidade antioxidante dentre as frações, foi investigada contra o estresse oxidativo e nitrosativo hepático em ratos Wistar diabéticos induzidos por estreptozotocina. Foram avaliados os parâmetros bioquímicos séricos, o estado oxidativo e nitrosativo hepático, o sistema de defesa da glutationa e os parâmetros farmacocinéticos in silico dos principais compostos da fração. Como resultados, foi observado que a fração acetato de etila inibiu a produção de IL-6 e NO nos macrófagos induzidos por LPS nas concentrações de 0,1 e 0,3 µg/mL (p < 0,001) e reduziu a nocicepção induzida pelo glutamato em 75 ± 7% na dose de 30 mg/kg (p < 0,001), sem alterar a atividade locomotora dos animais. Além disso, a fração acetato de etila (30 mg/kg) foi capaz de reverter a hiperalgesia aguda e tardia induzida por CFA (p < 0,05), além de reduzir o edema na fase aguda (p < 0,05), com reduções da atividade da mieloperoxidase (40 ± 12%, p < 0,05) e da infiltração de células inflamatórias polimorfonucleares no tecido da pata (40 ± 9%, p < 0,001). O tratamento dos ratos diabéticos com a fração n-butanol durante 30 dias, na dose de 50 mg/kg, diminuiu as atividades séricas de alanina aminotransferase, aspartato aminotransferase e fosfatase alcalina (p < 0,01), além de reduzir no fígado a peroxidação lipídica, a carbonilação e nitração de proteínas, o nível de óxido nítrico sintase induzível e as atividades e expressões de glutationa peroxidase, superóxido dismutase e catalase (p < 0,05). Houve também aumentos na capacidade antioxidante, na atividade da glutationa redutase e no nível de glutationa reduzida (p < 0,05). As predições in silico dos compostos fenólicos presentes na fração mostraram absorção e distribuição favoráveis, sem possíveis sinais de hepatotoxicidade. Os resultados apoiam os efeitos antinociceptivos, anti-inflamatórios e hepatoprotetores da casca do fruto de A. crassiflora, e sugerem que esses efeitos são desencadeados pela supressão de citocinas pró-inflamatórias, redução da infiltração de neutrófilos, e melhoria dos parâmetros oxidativos/nitrosativos hepático.
Abstract: The fruit peel of Annona crassiflora Mart., a species native to the Brazilian Cerrado, is a source of phenolic compounds with high antioxidant capacity. This study aimed to investigate the possible antinociceptive, anti-inflammatory and antioxidant properties of fractions rich in polyphenols from the A. crassiflora fruit peels in in vitro and in vivo models. Proinflammatory cytokines and nitric oxide (NO) production were evaluated in LPS-activated macrophages. The ethyl acetate fraction, being able to reduce the production of inflammatory mediators in macrophages, was administered orally in C57BL/6/J mice, and the animals were subjected to glutamate-induced nociception, Freund's adjuvant (CFA)-induced inflammation, and open field and rotarod tests for motor performance analysis. The n-butanol fraction, which showed the highest antioxidant capacity among the fractions, was investigated against hepatic oxidative and nitrosative stress in diabetic Wistar rats induced by streptozotocin. Serum biochemical parameters, hepatic oxidative and nitrosative status, glutathione defense system and in silico pharmacokinetic parameters of the main compounds of the fraction were evaluated. As results, the ethyl acetate fraction inhibited IL-6 and NO production in LPS-induced macrophages at concentrations of 0.1 and 0.3 µg/mL (p < 0.001) and reduced glutamate-induced nociception by 75 ± 7% at the dose of 30 mg/kg (p < 0.001), without changing the locomotor activity of the animals. In addition, the ethyl acetate fraction (30 mg/kg) was able to reverse the CFA-induced acute and late hyperalgesia (p < 0.05), in addition to reducing edema in the acute phase (p <0.05), with reductions in myeloperoxidase activity (40 ± 12%, p < 0.05) and inflammatory polymorphonuclear cell infiltration in the paw tissue (40 ± 9%, p < 0.001). The treatment of diabetic rats with the n-butanol fraction for 30 days, at the dose of 50 mg/kg, decreased the serum activities of alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase and alkaline phosphatase (p < 0.01), in addition to reducing in the hepatic lipid peroxidation, protein carbonylation and nitration, the level of inducible nitric oxide synthase and the activities and expressions of glutathione peroxidase, superoxide dismutase and catalase (p < 0.05). There were also increases in antioxidant capacity, glutathione reductase activity and reduced glutathione level (p < 0.05). The in silico predictions of the phenolic compounds present in the fraction showed favorable absorption and distribution, without possible signs of hepatotoxicity. The results support the antinociceptive, anti-inflammatory and hepatoprotective effects of A. crassiflora fruit peel, and suggest that these effects are triggered by the suppression of pro-inflammatory cytokines, reduction of neutrophil infiltration, and improvement of hepatic oxidative/nitrosative parameters.
Keywords: Annonaceae
Annonaceae
Antioxidante
Antioxidant
Araticum
Araticum
Estresse oxidativo
Oxidative stress
Fígado
Liver
Inflamação
Inflammation
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS
Subject: Genética
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Program: Programa de Pós-graduação em Fisioterapia
Quote: JUSTINO, Allisson Benatti. Compostos fenólicos da casca dos frutos de Annona crassiflora com propriedades antinociceptivas, anti-inflamatórias e antioxidantes em modelos in vitro e in vivo. 2021. 118 f. Tese (Doutorado em Genética e Bioquímica) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2021. Disponível em: http://doi.org/10.14393/ufu.te.2021.63.
Document identifier: http://doi.org/10.14393/ufu.te.2021.63
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/31301
Date of defense: 29-Jan-2021
Appears in Collections:TESE - Genética e Bioquímica

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