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https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/30746
Tipo do documento: | Trabalho de Conclusão de Curso |
Tipo de acesso: | Acesso Aberto |
Término do embargo: | 2022-12-02 |
Título: | Padronização de um modelo in vitro da doença hepática gordurosa associada ao metabolismo e caracterização do estresse oxidativo |
Autor(es): | Faria, Bruno Quintanilha |
Primeiro orientador: | Guerra, Joyce Ferreira da Costa |
Primeiro membro da banca: | Araújo , Thaise Gonçalves de Araújo |
Segundo membro da banca: | Carvalho , Mayara Medeiros de Freitas |
Resumo: | A doença hepática gordurosa associada ao metabolismo (MAFLD) representa um amplo espectro de condições clínico-patológicas do fígado caracterizadas por acúmulo de triacilglicerois nos hepatócitos, podendo evoluir para esteato-hepatite, fibrose e por fim a cirrose e carcinoma hepatocelular. A etiopatogênese da MAFLD é multifatorial e assintomática e, embora seus mecanismos moleculares ainda não sejam compreendidos, o estresse oxidativo é considerado o principal determinante. Portanto, objetivou-se neste estudo padronizar um modelo in vitro da MAFLD em células da linhagem HepG2. Para indução do acúmulo de lipídeos as células foram mantidas em meio DMEM, privadas de soro fetal bovino por 24 horas e então incubadas com os ácidos graxos, palmítico (0,7mM) ou mistura dos ácidos oleico e palmítico (1mM e 2mM) na proporção de 2:1, respectivamente. Para a quantificação do teor intracelular de lipídeos as células foram coradas com Oil red O, a viabilidade celular e a citotoxicidade foram avaliadas através da técnica de MTT e liberação de LDH, respectivamente, o dano hepatocelular pela liberação de aminotransferases hepáticas e o estresse oxidativo através da quantificação dos biomarcadores de peroxidação lipídica e dos níveis de glutationa total. O teor de lipídeos foi significativamente maior em células expostas a mistura de ácidos graxos nas concentrações de 1 e 2mM, não sendo observado redução da viabilidade ou aumento dos níveis de aminotransferases e liberação de LDH. O biomarcador de peroxidação lipídica também não aumentou após o tratamento, mas níveis reduzidos de glutationa total foram evidenciados. Os resultados obtidos demonstram que o modelo proposto foi eficiente em induzir esteatose e estresse oxidativo em células HepG2, principalmente quando expostas as concentrações de 1 e 2mM da mistura lipídica. |
Abstract: | Metabolism-associated fatty liver disease (MAFLD) represents a wide spectrum of clinical and pathological conditions of the liver characterized by the accumulation of triacylglycerols in hepatocytes, which may progress to steatohepatitis, fibrosis and eventually to cirrhosis and hepatocellular carcinoma. The etiopathogenesis of MAFLD is multifactorial and asymptomatic and, although its molecular mechanisms are not yet understood, oxidative stress is considered the main determinant. Therefore, the aim of this study was to establish an in vitro model of MAFLD in HepG2 cells. To fat-overloading induction, cells were kept in DMEM medium, deprived of fetal bovine serum for 24 hours and then incubated with fatty acids, palmitic (0.7mM) or mixture of oleic and palmitic acids (1mM and 2mM) in proportion 2: 1, respectively. To quantify the intracellular lipid content, cells were stained with Oil red O, cell viability and cytotoxicity were evaluated using the MTT and LDH release techniques, respectively, hepatocellular damage by the release of liver aminotransferases and oxidative stress through quantification of lipid peroxidation biomarkers and total glutathione levels. The lipid content was significantly higher in cells exposed to a mixture of fatty acids at concentrations of 1 and 2mM, with no reduction in viability or increased levels of aminotransferases and LDH release. The lipid peroxidation biomarker also did not increase after treatment, but reduced levels of total glutathione were evidenced. The results obtained demonstrate that the proposed model was efficient in inducing steatosis and oxidative stress in HepG2 cells, especially when exposed to concentrations of 1 and 2mM of the lipid mixture. |
Palavras-chave: | Ácidos graxos Células HepG2 Espécies reativas de oxigênio Esteatose hepática Glutationa |
Área(s) do CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::METABOLISMO E BIOENERGETICA |
Idioma: | por |
País: | Brasil |
Editora: | Universidade Federal de Uberlândia |
Referência: | QUINTANILHA, Bruno Faria. Padronização de um modelo in vitro da doença hepática gordurosa associada ao metabolismo e caracterização do estresse oxidativo. 2020. 54 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Biotecnologia) – Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2020. |
URI: | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/30746 |
Data de defesa: | 2-Dez-2020 |
Aparece nas coleções: | TCC - Biotecnologia (Patos de Minas) |
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