Publicação: Expressão, purificação e avaliação da inibição da atividade fosfolipásica A2 do inibidor recombinante rγCdcPLI de Crotalus durissus collilineatus
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS
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Coorientador
Gimenes, Sarah Natalie Cirilo
Resumo
As enzimas PLA2 de peçonhas de serpentes são muito investigadas dada a grande
variedade de seus efeitos farmacológicos, como cardiotoxicidade, anticoagulação,
neurotoxicidade, miotoxicidade, ativação e/ou inibição da agregação plaquetária, edema,
convulsão, hipotensão e hemorragia. Desta forma questionamentos da resistência das próprias
serpentes sobre o efeito deletério dessas enzimas em seu organismo, traz novas perspectivas
sobre os inibidores em seu sangue. Os inibidores de PLA2s oriundos do plasma de serpentes
têm sido estudados demonstrando um alto potencial terapêutico em patologias nas quais as
PLA2s protagonizam em vários eventos moleculares. Assim, este trabalho teve como objetivo
expressar, purificar e avaliar a inibição de um inibidor recombinante do tipo gama isolado do
soro da serpente Crotalus durissus collilinetaus expresso em um sistema heterologo utilizando
E. coli. Para a sua purificação foi utilizado dois passos cromatográficos um de troca iônica
utilizando a resina Q-Sepharose Fast Flow e o outro por afinidade pela afinidade em coluna
NHS imobilizada com PLA2 BnSP-7, sendo o grau de pureza avaliado por HPLC e Eletroforese
em gel de poliacrilamida com agentes desnaturantes (SDS-PAGE 12,5%). O perfil
cromatográfico na troca ionica apresentou 6 frações (Q1 a Q6). As frações Q4 e Q5
apresentaram uma banda na faixa de 25kDa correspondente a massa molecular do inibidor
nativo. O inibidor purificado apresenta um potencial inibitório sobre a atividade PLA2 da
peçonha de B. pauloensis semelhante ao inibidor nativo. No entanto novos estudos são
necessários para se traçar um melhor perfil de inibição frente a diferentes classes de PLA2s bem
como diferentes atividades biológicas induzidas por estas, tais como a atividade miotóxica,
edematogênica, inibição da agregação plaquetária, etc.
Abstract
Palavras-chave
Inibidores de PLA2, Fosfolipases A2
Citação
GONÇALVES, Marina Neves. Expressão, purificação e avaliação da inibição da atividade fosfolipásica A2 do inibidor recombinante rγCdcPLI de Crotalus durissus collilineatus. 2019. 44 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Ciências Biológicas) – Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2020.