Expressão transiente de uma Serinoprotease thrombin-like (rBPSP-I) da peçonha de Bothrops pauloensis em Nicotiana benthamiana

Gomide, José Augusto Leoncio

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DC Field	Value	Language
dc.creator	Gomide, José Augusto Leoncio	-
dc.date.accessioned	2020-09-17T16:34:42Z	-
dc.date.available	2020-09-17T16:34:42Z	-
dc.date.issued	2019-12-16	-
dc.identifier.citation	GOMIDE, José Augusto Leoncio. Expressão transiente de uma Serinoprotease thrombin-like (rBPSP-I) da peçonha de Bothrops pauloensis em Nicotiana benthamiana. 2019. 38 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Biotecnologia) – Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2020.	pt_BR
dc.identifier.uri	https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/29916	-
dc.description.sponsorship	FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais	pt_BR
dc.language	por	pt_BR
dc.publisher	Universidade Federal de Uberlândia	pt_BR
dc.rights	Acesso Aberto	pt_BR
dc.subject	Distúrbios hemostáticos	pt_BR
dc.subject	Hemofilia	pt_BR
dc.subject	Biofármaco	pt_BR
dc.subject	Biotecnologia vegetal	pt_BR
dc.subject	Proteína recombinante	pt_BR
dc.title	Expressão transiente de uma Serinoprotease thrombin-like (rBPSP-I) da peçonha de Bothrops pauloensis em Nicotiana benthamiana	pt_BR
dc.type	Trabalho de Conclusão de Curso	pt_BR
dc.contributor.advisor1	Nascimento, Rafael	-
dc.contributor.advisor1Lattes	http://lattes.cnpq.br/5425179966802543	pt_BR
dc.contributor.referee1	Nasimento, Rafael	-
dc.contributor.referee1Lattes	http://lattes.cnpq.br/5425179966802543	pt_BR
dc.contributor.referee2	Souza, Hebréia Oliveira Almeida	-
dc.contributor.referee2Lattes	http://lattes.cnpq.br/5870573117115050	pt_BR
dc.contributor.referee3	Rodrigues, Renata Santos	-
dc.contributor.referee3Lattes	http://lattes.cnpq.br/2516569970975669	pt_BR
dc.creator.Lattes	http://lattes.cnpq.br/6959724938122076	pt_BR
dc.description.degreename	Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação)	pt_BR
dc.description.resumo	A peçonha ofídica é composta majoritariamente de proteínas, como as serinoproteases. Entre essas, especifica-se as serinoproteases thrombin-like, cujo efeito coagulante já foi comprovado, sendo assim, um possível fármaco para o tratamento de desregulações hemostáticas, como a Hemofilia. Desse modo, visou-se realizar a síntese e a caracterização funcional da serinoprotease thrombin-like recombinante (rSBP-I) da peçonha de Bothrops pauloensis, serpente típica do Cerrado brasileiro, expressa em Nicotiana benthamiana. Para a realização da síntesse da proteína de interesse fez-se a clonagem de colônias de E. coli DH5α, previamente transformadas com a sequência de genes referente a rSBP-I inserida no vetor pEAQ-HT, e posterior transformação por eletroporação de colônias de R. radiobacter EHA105 com o material genético de colônias de E. coli com transformação confirmada por PCR seguida de uma eletroforese em gel de agarose. Depois de confirmar a transformação das R. radiobacter, realizou-se a agroinfiltração com colônias bacterianas confirmadas na região abaxial de folhas de Nicotiana benthamiana por pressão de seringa. Cinco dias após a infiltração, realizou-se a coleta das folhas infiltradas e material selvagem (folhas de plantas não infiltradas). Posteriormente, fez-se a extração rpoteica dos materiais coletados, cujos extratos foram purificados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC). Tais materiais purificados foram dialisados, liofilizados e ressuspendidos, sendo posteriormente quantificados pelo método de Bradford, assim como os extratos proteicos. Para confirmar a expressão da rSBP-I, realizou-se o protocolo de Western Blotting tanto dos extratos quanto dos materiais purificados. De modo a determinar a funcionalidade parcial da rSBP-I expressa, analisou-se a Atividade Fibrinogenolítica da proteína com variação de tempo de reação. Ao final do estudo, foi detectada uma proteína presente no material extraido das folhas infiltradas com a construção rBPSP-I e ausente no material controle. Entretanto a massa molecular observada é inferior a massa teórica esperada, fazendo com que não fosse possível afirmar que proteína recombinante de interesse foi produzida em plantas de Nicotiana benthamiana infiltradas. Foi possível observar um efeito fibrinogenolítico em extratos proteicos de folhas infiltradas no tratamento de 60 minutos quando comparado ao material controle. Estudos posteriores deverão ser realizados para a confirmação da identidade da proteína expressa.	pt_BR
dc.publisher.country	Brasil	pt_BR
dc.publisher.course	Biotecnologia	pt_BR
dc.sizeorduration	38	pt_BR
dc.subject.cnpq	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA	pt_BR
dc.subject.cnpq	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA	pt_BR
dc.orcid.putcode	80538931	-
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