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Tipo do documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso Aberto
Título: Purificação e caracterização parcial de ATPase de encéfalo de rata
Título(s) alternativo(s): Purification and partial characterization of rat brain ATPase
Autor(es): Santos, Ana Cecília Silva
Primeiro orientador: Coelho, Milton Vieira
Primeiro membro da banca: Espíndola, Foued Salmen
Segundo membro da banca: Cameron, Luiz Cláudio
Terceiro membro da banca: Espreáfico, Enilza Maria
Resumo: Neste trabalho foi purificado e caracterizado parcialmente uma ATPase de cérebro de rata utilizando cpolunas de DEAE-Sepharose e fosfocelulose. Os cérebros foram homogeneizados em Tampão Imidazol pH 8,0 e centrifugados, a 4ºC, a 38.900 g X 40 minutos. O sobrenadante foi aplicado à uma coluna de DEAE-Sepharose e, ao “Flow Through” coletado foi adicionado sulfato de amônia em pó até atingir 35% de saturação. Após centrifugação, o sobrenadante obtido é aplicado em coluna de fosfocelulose centrifugação, o sobrenadante obtido é aplicado em coluna de fosfocelulose em pH 6,8 e proteínas retidas foram eluídas alterando o pH para 8,0. As frações eluídas desta coluna apresentam polipeptídeos de menor peso molecular entre 50 e 60 kDa. A fração enriquecida em atividade ATPásica possui as seguintes características: 1) Na concentração de 1,0 mM de substrato a atividade ATPásica é 2,5 vezes maior do que a atividade GTPásica; 2)Atividade MgATPásica é 20 vezes maior do que a atividade CaATPásica e não é sensível a Ca++ e Ca ++/CaM ; 3)Não apresentou estimulação por actina e não foi detectado atividade K-EDTA ATPásica; 4) Éinibida na presença de altas concentrações de sais (NaCI, KCI e KI 0,3M), fluoreto de alumínio e Triton X 100 0,2%; 5) Não é inibida pela azida e pelo vanadato; 6)A atividade é maior em pH ácido(pH 5,0).
Abstract: In this work, a rat brain ATPase was purified and partially characterized using DEAE-Sepharose and phosphocellulose columns. The brains were homogenized in Imidazole Buffer pH 8.0 and centrifuged, at 4ºC, at 38,900 g X 40 minutes. The supernatant was applied to a DEAE-Sepharose column and to the collected Flow Through powder ammonium sulfate was added until it reached 35% saturation. After centrifugation, the supernatant obtained is applied to a phosphocellulose column centrifugation, the obtained supernatant is applied to a phosphocellulose column at pH 6.8 and retained proteins were eluted changing the pH to 8.0. The fractions eluted from this column have polypeptides of lower molecular weight between 50 and 60 kDa. The fraction enriched in ATPásica activity has the following characteristics: 1) In the concentration of 1.0 mM of substrate the ATPásica activity is 2.5 times greater than the GTPásica activity; 2) MgATPásica activity is 20 times greater than CaATPásica activity and is not sensitive to Ca ++ and Ca ++ / CaM; 3) There was no actin stimulation and no K-EDTA ATPasic activity was detected; 4) It is inhibited in the presence of high concentrations of salts (NaCI, KCI and 0.3M KI), aluminum fluoride and 0.2% Triton X 100; 5) It is not inhibited by azide and vanadate; 6) The activity is higher in acidic pH (pH 5.0).
Palavras-chave: Motores moleculares
Miosina
Cinesína
Área(s) do CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
Assunto: Ratos como animais de laboratório
Idioma: por
País: Brasil
Editora: Universidade Federal de Uberlândia
Programa: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
Referência: SANTOS, Ana Cecília Silva. Purificação e caracterização parcial de ATPase de encéfalo de rata. 1997. 76 f. Dissertação (Mestrado em Genética e Bioquímica) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2020. DOI http://doi.org/10.14393/ufu.di.1997.17
Identificador do documento: http://doi.org/10.14393/ufu.di.1997.17
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/29828
Data de defesa: 1997
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