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ORCID:  http://orcid.org/0000-0002-5543-8603
Document type: Tese
Access type: Acesso Aberto
Title: Desenvolvimento de imunoensaio para detecção de IgG4 específico ao alérgeno rBlo t 5 e tratamento de modelo experimental na asma aguda
Alternate title (s): Immunoassay Development for Allergen-Specific IgG4 Detection rBlo t 5 and Experimental Model Treatment in Acute Asthma
Author: Araújo, Karine Canuto Loureiro de
First Advisor: Cunha Junior, Jair Pereira da
First member of the Committee: Rodrigues, Claudia Mendonça
Second member of the Committee: Japolla, Greice
Third member of the Committee: Gomes, Angélica Oliveira
Fourth member of the Committee: Silva, Elisângela Rosa da
Summary: Doenças alérgicas representam uma condição médica comum, que tem aumentado nas últimas décadas, e por isso é considerada um problema de saúde pública. A exposição a alérgenos presentes na poeira doméstica é um importante fator de risco para o desenvolvimento do processo alérgico. O ácaro Blomia tropicalis é reconhecidamente indutor de alergias respiratórias em regiões tropicais, sendo o alérgeno Blo t 5 considerado de maior importância. A pesquisa in vitro de anticorpos IgE e IgG4, como ferramenta diagnóstica, é importante no acompanhamento do quadro imunológico de pacientes submetidos à imunoterapia para possibilitar melhor prognóstico em resposta a alergia, e também para indicar tratamentos específicos de acordo com o perfil imunológico de cada indíviduo. Assim, os objetivos do trabalho são desenvolver uma plataforma de detecção fluorescente que facilite o monitoramento de anticorpos IgG4 alérgenos específicos, e avaliar o efeito da associação das drogas fuorato de fluticasona e 15d- PGJ2 no tratamento da asma aguda em modelo experimental. Para desenvolver uma plataforma de detecção de IgG4, antígenos de rBlo t 5 foram acoplados às microesferas magnéticas N-Hidroxisuccinimida (NHS). Resultados in vitro realizados para detecção de IgG mostraram que as beads foram funcionalizadas com alérgeno Blo t 5. Foi desenvolvido um ensaio de fluorescência baseado em beads magnéticas (EFB), onde observou-se a discriminação entre as amostras de pacientes positivas e negativos especificos a IgG4. A ferramenta é vantajosa por ser rápida e por utilizar baixa quantidade de amostra (5µL de soro) quando comparada a outros testes disponíveis. Após diagnóstico e monitoramento do quadro do paciente alérgico, o indíviduo é submetido a diferentes tipos de tratamentos. Para o alívio sintomático de indivíduos asmáticos, são utilizados principalmente corticosteroides, porém esses medicamentos possuem reações adversas. O modelo experimental de asma foi desenvolvido em camundongos Balb/c em protocolo de 14 dias. Os animais foram sensibilizados via i.p. no dia 0, e desafiados por 5 dias, do dia 6 ao dia 10 com solução de OVA adsorvido em solução de PBS via i.n., e posteriormente foram tratados em diferentes condições de 15-Deoxy-Delta-12,14-prostaglandin J2 (15d-PGJ2) e/ou furoato de fluticasona. O grupo sensibilizado com OVA exibiu aumento nos níveis de IgE no soro e homogenato comparados ao grupo controle negativo (PBS). Com a finalidade de compreender o melhor tratamento para casos de asma aguda e qual o mecanismo desencadeado pela combinação das drogas, furoato de fluticasona e 15d- PGJ2, foram dosados anticorpos (IgE/ IgG/ IgG1/ IgG2a) e citocinas (IL-10/ IL-5). Para consolidar os resultados foram feitas análises histológicas e avaliação de parâmetro respiratório de cada condição dos tratamentos propostos. Observa-se que em comparação ao grupo de camundongos induzidos por OVA, o grupo de animais tratados com as drogas isoladamente exibiram na análise histológica uma redução na inflamação das vias aéreas. As análises mostram também que a combinação das drogas fuorato de fluticasona com 15d-PGJ2 não é eficiente para tratar modelo experimental da asma aguda, já que animais que receberam esta associação de fármacos demostraram maior infiltrado inflamatório pulmonar, maior depósito de colágeno neste órgão e não apresentaram melhoras nos parâmetros de função de respiratória. Devido aos efeitos adversos mais graves causados pela intervenção com glicocorticoides, é importante avaliar novas formas de tratamento para alergia.
Abstract: Allergic diseases represent a common medical condition, which has increased in recent decades, and is therefore considered a public health problem. Exposure to allergens in household dust is an important risk factor for the development of the allergic process. The Blomia tropicalis mite is known to induce respiratory allergies in tropical regions, being the Blo t 5 allergen considered of major importance. In vitro screening for IgE and IgG4 antibodies, as a diagnostic tool, is important in monitoring the immune status of patients undergoing immunotherapy to enable better prognosis in response to allergy, and to indicate specific treatments according to the immunological profile of each individual. Thus, the objectives of this work are to develop a fluorescent detection platform that facilitates the monitoring of specific allergen IgG4 antibodies, and to evaluate the effect of the combination of fluticasone fuorate and 15d-PGJ2 drugs in the treatment of acute asthma in an experimental model. To develop an IgG4 detection platform, rBlo t 5 antigens were coupled to the N-Hydroxysuccinimide (NHS) magnetic microspheres. In vitro results for IgG detection showed that the beads were functionalized with Blo t 5 allergen. A fluorescence-based magnetic beads (EFB) assay was developed, where discrimination between specimens from positive and negative patients specific to IgG4. The tool is advantageous in that it is fast and uses a small amount of sample (5µL of serum) when compared to other available tests. After diagnosis and monitoring of the allergic patient's condition, the individual is submitted to different types of treatments. For symptomatic relief of asthmatic individuals, corticosteroids are mainly used, but these medications have adverse reactions. The experimental asthma model was developed in Balb / c mice in a 14-day protocol. Animals were sensitized via i.p. on day 0, and challenged for 5 days, from day 6 to day 10 with OVA solution adsorbed in PBS solution via in, and subsequently treated under different conditions of 15-Deoxy-Delta-12,14-prostaglandin J2 (15d -PGJ2) and / or fluticasone furoate. The OVA sensitized group exhibited increased serum IgE and homogenate levels compared to the negative control group (PBS). In order to understand the best treatment for acute asthma cases and the mechanism triggered by the combination of drugs, fluticasone furoate and 15d-PGJ2, antibodies (IgE / IgG / IgG1 / IgG2a) and cytokines (IL-10 / IL-5). To consolidate the results, histological analyzes and respiratory parameter evaluation of each condition of the proposed treatments were performed. Compared to the group of mice induced by OVA, the group of animals treated with drugs alone exhibited a reduction in airway inflammation in the histological analysis. Analyzes also show that the combination of fluticasone fuorate drugs with 15d-PGJ2 is not efficient to treat an experimental model of acute asthma, since animals that received this combination of drugs showed greater pulmonary inflammatory infiltrate, higher collagen deposition in this organ and not showed improvements in respiratory function parameters. Due to the more serious adverse effects caused by glucocorticoid intervention, it is important to evaluate new forms of treatment for allergy.
Keywords: Alergia
Allergy
Asma
Asthma
Tratamento
Treatment
Anticorpos IgG4
IgG4 antibodies
Diagnóstico
Diagnosis
Furoato de fluticasona
Fluticasone fuorate
EFB
rBlo t 5
15d-PGJ2
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Program: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
Quote: ARAÚJO, Karine Canuto Loureiro de. Desenvolvimento de imunoensaio para detecção de IgG4 específico ao alérgeno rBlo t 5 e tratamento de modelo experimental na asma aguda. 2019. 93 f. Tese (Doutorado em Genética e Bioquímica) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2019. Disponível em: http://dx.doi.org/1014393/ufu.te.2019.1260.
Document identifier: http://dx.doi.org/10.14393/ufii.te.2019.1260
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/28663
Date of defense: 31-Jul-2019
Appears in Collections:TESE - Genética e Bioquímica

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