Localização de receptores de Beta-NGF (p75 e Trk) em células do cúmulo e ovócitos imaturos bovinos e sua estimulação com Beta-NGF durante a maturação in vitro

Abstract

The use of biotechnologies has become increasingly frequent as a way to increase the efficiency of cattle reproduction in Brazil. One of the main techniques, in vitro embryo production, allows the production of a larger number of calves per cow with higher genetic potential in a shorter period. However, as it is a high-cost process, researchers are looking for ways to increase its efficiency. It has been identified that Beta-NGF, protein purified from seminal plasma of mammals, when administered to females during insemination, improves the function of the corpus luteum. Likewise, a positive correlation was also found between the amount of Beta-NGF in sperm and the rates of cleavage and blastocyst in the in vitro production of embryos, indicating possible action during the initial embryonic development. The aim of this study was to identify Beta-NGF receptors (p75 and Trk) in immature bovine oocytes and their cumulus cells and to verify the effect of Beta-NGF supplementation of the oocyte maturation medium in bovine embryo in vitro production routines. (PIVE). Cumulus oocyte complexes (COC) were marked by indirect immunofluorescence for p75 and TrK receptors and evaluated using laser scanning confocal microscopy. Four routines were also performed, where part of the oocytes were matured with medium supplemented with Beta-NGF and part with non-supplemented medium. Both receptors were located in oocytes and in the cells of the cumulus. Routines where oocyte maturation supplemented with Beta-NGF were used had better rates of cleavage and blastocyst formation (paired t-test, p <0.05). Thus, it was demonstrated that Beta-NGF acts in both oocytes and granular cells, through both receptors, p75 and TrK, and that supplementation of the maturation medium with Beta-NGF is an alternative to improve the results of bovine in vitro embryo production.

El uso de biotecnologías se ha vuelto cada vez más frecuente como una forma de aumentar la eficiencia de la ganadería en Brasil. Una de las técnicas principales, la producción de embriones in vitro (PIVE), permite la producción de un mayor número de terneros por vaca con alto potencial genético en un período de tiempo más corto. Sin embargo, como es un proceso de alto costo, se investigan formas de aumentar su eficiencia. Se ha identificado que la proteína Beta-NGF purificada del plasma seminal de mamíferos, cuando se administra a hembras durante la inseminación, mejora la función del cuerpo lúteo. Asimismo, también se encontró una correlación positiva entre la cantidad de Beta-NGF en el esperma y las tasas de clivaje y blastocisto en la producción in vitro de embriones, lo que indica una posible acción durante el desarrollo embrionario temprano. El objetivo de este estudio fue identificar los receptores Beta-NGF (p75 y Trk) en los ovocitos inmaduros bovinos y sus células del cúmulo y verificar el efecto de la suplementación de Beta-NGF en el medio de maduración de ovocitos en las rutinas de producción in vitro de embriones bovinos (PIVE). Los complejos de ovocitos cúmulos (COC) se marcaron por inmunofluorescencia indirecta para receptores p75 y TrK y se evaluaron mediante microscopía confocal de barrido láser. También se realizaron cuatro rutinas PIVE, donde parte de los ovocitos se maduraron con medio suplementado con Beta-NGF y parte con medio no suplementado. Ambos receptores se ubicaron en los ovocitos y en las células del cúmulo. Las PIVEs en los que se utilizó la maduración de ovocitos suplementada con Beta-NGF tuvieron mejores tasas de clivaje y formación de blastocistos (prueba t pareada, p <0.05). Por lo tanto, se demostró que Beta-NGF actúa tanto en los ovocitos como en las células granulares, a través de ambos receptores, p75 y TrK, y que la suplementación del medio de maduración con Beta-NGF es una alternativa para mejorar los resultados de las PIVEs bovinos.