Perfil transcricional do gene ARID1A em células de Câncer de Próstata

Martins, Isabella Castro

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Document type:	Trabalho de Conclusão de Curso
Access type:	Acesso Aberto
Title:	Perfil transcricional do gene ARID1A em células de Câncer de Próstata
Author:	Martins, Isabella Castro
First Advisor:	Araújo, Thaise Gonçalves de
Summary:	O Câncer de Próstata (CaP) é, atualmente, o segundo tipo mais frequente entre os homens brasileiros, ficando atrás somente do câncer de pele não melanoma. O surgimento e a progressão dessa neoplasia maligna estão associados a diversos eventos moleculares que controlam a expressão de diferentes genes. A proteína ARID1A é a uma das subunidades que confere especificidade ao complexo de remodelagem da cromatina SWI/SNFA (BAF), descrita como supressora tumoral. Porém, seu papel no CaP ainda não foi elucidado. Nesse sentido, avaliamos o papel dos transcritos do gene ARID1A na tumorigênese prostática por qPCR, bem como correlacionamos sua expressão com os níveis de mRNA dos genes ANXA1, AR, PSA, AR-V7 e HER2. Foram extraídos o mRNA total das linhagens tumorais prostáticas LNCaP (hormônio-dependente), DU145 e PC3 (hormônio-independentes) e da não-tumorigênica RWPE-1. Foi otimizado o método Cq comparativo a fim de avaliar os transcritos normalizados pelo gene B2M. A expressão de ARID1A foi 1,22 e 1,15 vezes maior nas linhagens LNCaP e PC3 quando comparadas à RWPE-1 (P<0,05; P<0,01, respectivamente). A expressão de mRNA de ANXA1 diminuiu na linhagem hormônio-dependente, com transcritos significativamente maiores em DU145 e PC3. Foram detectados transcritos dos genes AR e PSA apenas na linhagem LNCaP. Para o AR-V7 seus níveis transcricionais se mostraram elevados em LNCaP, comparando-se à DU145 (20,13 vezes) e à PC3 (4,64 vezes) (P<0,01; P<0,01). A expressão de HER2 também se destacou em LNCaP. Nesta, 8,43, 9,34 e 4,43 mais transcritos foram quantificados quando comparados à RWPE-1, DU145 e PC3, respectivamente (P<0,0001; P<0,0001; P<0,001). Os resultados para ARID1A não se correlacionaram com os demais. Foi verificada uma correlação negativa entre ANXA1 e os alvos AR, PSA, AR-V7 e HER2. Estes quatro últimos apresentaram correlação positiva entre si (R>0,94). Os resultados sugerem que ARID1A esteja envolvido no surgimento ou desenvolvimento inicial do CaP, que a perda de ANXA1 em LNCaP esteja relacionada com a gênese do tumor e sua posterior elevação em DU145 e PC3 pode estar associada à resistência a terapia hormonal. São necessários experimentos que avaliem o comportamento das proteínas produzidas por esses genes para posterior aplicação como biomarcadores direcionados ao CaP avançado.
Abstract:	Prostate cancer (CaP) is the second most common cancer among Brazilian men, after non-melanoma skin cancer. The onset and progression of this malignant neoplasm are associated with several molecular events that control the expression of different genes. The ARID1A protein is one of the subunits that confers specificity to the SWI / SNFA (BAF) chromatin remodeling complex, described as a tumor suppressor. However, its role in PCa has not yet been elucidated. In this sense, we analyzed the role of ARID1A gene transcripts in prostatic tumorigenesis by qPCR. We also correlated the expression of ARID1A with the mRNA levels of the ANXA1, AR, PSA, AR-V7 and HER2 genes. Total mRNA was extracted from LNCaP (hormone-dependent), DU145 and PC3 (hormone-independent) and non-tumorigenic RWPE-1 prostatic cell lines. The comparative Cq method was optimized to quantify the transcripts normalized by the B2M gene. The expression of ARID1A was 1.22 and 1.15 fold higher in LNCaP and PC3 lineages when compared to RWPE-1 (P<0.05; P<0.01, respectively). The mRNA expression of ANXA1 was downregulated in the hormone-dependent lineage, with significantly higher transcripts in DU145 and PC3. Transcripts of the AR and PSA genes were detected only in the LNCaP cell line (P<0.001; P<0.0001). The expression of AR-V7 increased in tumor cell lines, with higher transcriptional levels in LNCaP, compared to DU145 (20.13-fold) and PC3 (4.64-fold) (P<0.01; P<0.01). HER2 expression was also upregulated in LNCaP with increased transcripts (8.43-fold, 9.34-fold and 4.43-fold) when compared to RWPE-1, DU145 and PC3, respectively (P<0.0001; P<0.0001; P<0.001). The ARID1A transcripts did not correlate with the others. A negative correlation was verified between ANXA1 and the AR, PSA, AR-V7 and HER2 targets. The latter four presented a positive correlation with each other (R>0.94). The results suggest that ARID1A is involved in the onset or initial development of PCa. The loss of ANXA1 in LNCaP may be related to the tumor's genesis and the subsequent elevation of mRNA levels in DU145 and PC3 may be associated to the resistance to hormone therapy. Additional experiments are needed to evaluate the behavior of the proteins transcribed by these genes for validation of biomarkers to advanced PCa.
Keywords:	Epigenética Epigenetics qPCR Marcador molecular Molecular marker Remodelagem de cromatina Remodeling of chromatin Complexo SWI/SNF SWI/SNF complex
Area (s) of CNPq:	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
Language:	por
Country:	Brasil
Publisher:	Universidade Federal de Uberlândia
Quote:	MARTINS, Isabella Castro. Perfil transcricional do gene ARID1A em células de Câncer de Próstata. 2018. 53 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Biotecnologia) – Universidade Federal de Uberlândia, Patos de Minas, 2018.
URI:	https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/25344
Date of defense:	11-Dec-2018
Appears in Collections:	TCC - Biotecnologia (Patos de Minas)

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