Publicação: Rastreamento em células in vitro de uma fosfolipase A2 da peçonha de Bothrops alternatus por meio de pontos quânticos de tamanhos mágicos
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA
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Mamede, Carla Cristine Neves
Resumo
As fosfolipases A2 representam uma classe de enzimas com importante aplicação na medicina. Entretanto, o rastreamento direto em células tem sido difícil devido à ausência de um marcador estável, efetivo e específico para essas enzimas. Os pontos quânticos de tamanhos mágicos (MSPQs) são nanocristais de tamanho extremamente pequeno e com propriedades físicas únicas. Além disso, são excelentes marcadores luminescentes biocompatíveis e podem ser conjugados com várias biomoléculas. Neste trabalho, nós etiquetamos a BaltPLA2, uma fosfolipase A2 isolada da peçonha de Bothrops alternatus, com MSPQs de seleneto de cádmio/sulfeto de cádmio (CdSe/CdS). A bioconjugação foi confirmada usando espectros de infravermelho e microscopia de fluorescência, os quais demonstraram que os CdSe/CdS MSQDs interagem com a BaltPLA2 sem interferir em sua atividade catalítica. Essa sonda permitiu o rastreamento da BaltPLA2 desde sua entrada através da membrana plasmática até sua incorporação no núcleo dos mioblastos. Estudos complementares foram realizados a fim de avaliar a atividade antiviral da BatPLA2 contra o vírus da dengue. Nossos testes mostraram a diminuição de aproximadamente 72% 50%, 56% da citotoxicidade causada pela infecção pelo DENV nos ensaios virucida, pós-tratamento e adsorção, respectivamente. Assim, os resultados demonstraram a atividade antiviral da BaltPLA2 e que esta proteína pode ser uma importante ferramenta para o desenvolvimento de alternativas terapêuticas no futuro.
Abstract
Phospholipases A2 represent a family of enzymes with important application in medicine. However, direct tracking in cells has been difficult due to the absence of a stable, effective and specific marker for these enzymes. Magic-sized quantum dots (MSQDs) are nanocrystals of extremely small size and with unique physical properties. In addition, they are excellent biocompatible luminescent markers and can be conjugated to various biomolecules. In this work, we labelled BaltPLA2, a PLA2 isolated from Bothrops alternatus snake venom, with Cadmium selenide (CdSe)/cadmium sulphate (CdS) MSQDs. Bioconjugation was confirmed using infrared spectra and fluorescence microscopy, which demonstrated that the CdSe/CdS MSQDs interact with BaltPLA2 without interfering with its catalytic activity. This probe allowed the tracking of BaltPLA2 since its entry through the plasma membrane to its incorporation into the myoblast nucleus. Complementary studies were carried out to evaluate the antiviral activity of BatPLA2 against the dengue virus. Our tests showed a decrease of approximately 72% 50%, 56% of the cytotoxicity caused by DENV2 infection in the virucidal, post-treatment and adsorption assays, respectively. Thus, the results demonstrated the antiviral activity of BaltPLA2 and that this protein could be an important tool for the development of therapeutic alternatives in the future.
Palavras-chave
Fosfolipases A2, Bioquímica, Pontos quânticos de tamanhos mágicos, Antiviral, Dengue, Agentes antivirais, Fosfolipases, Phospholipase A2, Magic-sized quantum dot
Citação
DIAS, Edigar Henrique Vaz. Rastreamento em células in vitro de uma fosfolipase A2 da peçonha de Bothrops alternatus por meio de pontos quânticos de tamanhos mágicos. 2019. 98 f. Tese (Doutorado em Genética e Bioquímica) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2018. DOI http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2019.1234