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Document type: Tese
Access type: Acesso Aberto
Title: Rastreamento em células in vitro de uma fosfolipase A2 da peçonha de Bothrops alternatus por meio de pontos quânticos de tamanhos mágicos
Alternate title (s): In vitro tracking of phospholipase A2 from Bothrops alternatus venom by magic-sized quantum dots
Author: Dias, Edigar Henrique Vaz
First Advisor: Silva, Anielle Christine Almeida
First coorientator: Mamede, Carla Cristine Neves
First member of the Committee: Silva, Anielle Christine Almeida
Second member of the Committee: Santos, Fabiana de Almeida Araújo
Third member of the Committee: Satos Filho, Norival Alves
Fourth member of the Committee: Ávila, Veridiana de Melo Rodrigues
Fifth member of the Committee: Yokosawa, Jonny
Summary: As fosfolipases A2 representam uma classe de enzimas com importante aplicação na medicina. Entretanto, o rastreamento direto em células tem sido difícil devido à ausência de um marcador estável, efetivo e específico para essas enzimas. Os pontos quânticos de tamanhos mágicos (MSPQs) são nanocristais de tamanho extremamente pequeno e com propriedades físicas únicas. Além disso, são excelentes marcadores luminescentes biocompatíveis e podem ser conjugados com várias biomoléculas. Neste trabalho, nós etiquetamos a BaltPLA2, uma fosfolipase A2 isolada da peçonha de Bothrops alternatus, com MSPQs de seleneto de cádmio/sulfeto de cádmio (CdSe/CdS). A bioconjugação foi confirmada usando espectros de infravermelho e microscopia de fluorescência, os quais demonstraram que os CdSe/CdS MSQDs interagem com a BaltPLA2 sem interferir em sua atividade catalítica. Essa sonda permitiu o rastreamento da BaltPLA2 desde sua entrada através da membrana plasmática até sua incorporação no núcleo dos mioblastos. Estudos complementares foram realizados a fim de avaliar a atividade antiviral da BatPLA2 contra o vírus da dengue. Nossos testes mostraram a diminuição de aproximadamente 72% 50%, 56% da citotoxicidade causada pela infecção pelo DENV nos ensaios virucida, pós-tratamento e adsorção, respectivamente. Assim, os resultados demonstraram a atividade antiviral da BaltPLA2 e que esta proteína pode ser uma importante ferramenta para o desenvolvimento de alternativas terapêuticas no futuro.
Abstract: Phospholipases A2 represent a family of enzymes with important application in medicine. However, direct tracking in cells has been difficult due to the absence of a stable, effective and specific marker for these enzymes. Magic-sized quantum dots (MSQDs) are nanocrystals of extremely small size and with unique physical properties. In addition, they are excellent biocompatible luminescent markers and can be conjugated to various biomolecules. In this work, we labelled BaltPLA2, a PLA2 isolated from Bothrops alternatus snake venom, with Cadmium selenide (CdSe)/cadmium sulphate (CdS) MSQDs. Bioconjugation was confirmed using infrared spectra and fluorescence microscopy, which demonstrated that the CdSe/CdS MSQDs interact with BaltPLA2 without interfering with its catalytic activity. This probe allowed the tracking of BaltPLA2 since its entry through the plasma membrane to its incorporation into the myoblast nucleus. Complementary studies were carried out to evaluate the antiviral activity of BatPLA2 against the dengue virus. Our tests showed a decrease of approximately 72% 50%, 56% of the cytotoxicity caused by DENV2 infection in the virucidal, post-treatment and adsorption assays, respectively. Thus, the results demonstrated the antiviral activity of BaltPLA2 and that this protein could be an important tool for the development of therapeutic alternatives in the future.
Keywords: Fosfolipases A2
Bioquímica
Pontos quânticos de tamanhos mágicos
Antiviral
Dengue
Agentes antivirais
Fosfolipases
Phospholipase A2
Magic-sized quantum dot
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Program: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
Quote: DIAS, Edigar Henrique Vaz. Rastreamento em células in vitro de uma fosfolipase A2 da peçonha de Bothrops alternatus por meio de pontos quânticos de tamanhos mágicos. 2019. 98 f. Tese (Doutorado em Genética e Bioquímica) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2018. DOI http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2019.1234
Document identifier: http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2019.1234
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/24938
Date of defense: 29-Mar-2019
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