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Document type: Dissertação
Access type: Acesso Embargado
Title: Associação de produtos naturais e anfotericina b para o tratamento da leishmaniose visceral
Alternate title (s): Association of natural products and amphotericin b for the treatment of visceral leishmaniasis
Author: Dias, Eliane Martins Ferreira Abdias
First Advisor: Silva, Sydnei Magno da
First coorientator: Paula, Renata Cristina de
First member of the Committee: Alves, Ceres Luciana
Second member of the Committee: Miranda, Juliana Silva
Summary: A leishmaniose visceral (LV) é uma doença negligenciada, causadas por protozoários do gênero Leishmania, intimamente ligada a pobreza. É, também, a segunda doença parasitária que mata mais no mundo. O tratamento é a principal forma de controle da LV, entretanto, possui várias limitações: é prolongado, apresenta toxicidade e alto custo, dentre outras. A seleção de parasitos resistentes as medicações disponíveis também é outra limitação importante, especialmente em alguns países, como o Brasil. Assim, há a necessidade de implementação de novas estratégias terapêuticas para o tratamento da LV, como o reposicionamento e a associação de drogas, que provaram ser ferramentas muito importantes no manejo de diversas doenças, como HIV, malária e câncer. Os produtos naturais sempre estiveram presentes na busca por novas alternativas de tratamento e novos medicamentos. O presente trabalho objetivou avaliar a ação dos produtos naturais bisabolol, eugenol e lapachol, com atividade antileishmania descrita na literatura, em combinação com a anfotericina b, droga referência, em modelos in vitro e in vivo de LV. A concentração inibitória (CI50) e a concentração citototóxica (CC50) de cada uma das drogas foram calculadas e os índices terapêuticos (IT) foram determinados. Em seguida, realizou-se o estudo da interação das combinações entre os produtos naturais e a anfotericina b em promastigotas de Leishmania infantum. Os resultados foram analisados pelo método do isobolograma de proporção fixa, e as concentrações inibitórias fracionadas (CIF) foram analisadas; A soma de CIF (ΣCIF) e a média ΣCIF (XΣCIF) foram calculadas para cada combinação. A natureza das interações foi classificada de acordo com a média de XΣCIF. A combinação de eugenol e bisabolol com anfotericina b mostrou valores XΣCIF que indicaram interação aditiva ou indiferente. Devido aos resultados promissores nos ensaios in vitro, o eugenol foi selecionado para avaliação da associação com anfotericina b, in vivo. Neste ensaio, camundongos BALB/c com LV foram distribuídos aleatoriamente em cinco grupos (n=6) e foram tratados (i) por via intraperitoneal (ip) com anfotericina b na dose de 5mg/Kg/48h/10 dias (dose padrão); (ii) anfotericina b na dose de 1mg/kg/24h/10 dias (subdose) por via ip; (iii) eugenol 75mg/kg/24h/10 dias via oral; com a associação anfotericina b 1mg/Kg/24h/10 dias/ip e eugenol 75mg/kg/24h/10 dias via oral (iv), e um grupo controle sem tratamento (v). Após o tratamento, os animais foram eutanásiados e a carga parasitaria do fígado e baço determinada através de qPCR. Houve redução significativa da carga parasitária no baço (p < 0,05) e fígado (p < 0,01) dos animais tratados com a combinação de eugenol e sub dose de anfotericina b em relação ao grupo controle não tratado. De forma surpreendente, o impacto na redução da carga parasitária nos órgãos dos camundongos proporcionado pela combinação de eugenol + anfotericiaa b foi semelhante aquele induzido pelo tratamento padrão com anfotericina b, que utiliza uma dose 5 vezes maior da droga que a usada na combinação. Os resultados sugerem que a combinação eugenol + anfotericina b apresentou efeito aditivo ou sinérgico, em modelo murino de LV. Em conclusão, de maneira inédita este trabalho propõe a associação entre o produto natural eugenol e a droga referência anfotericina b em sub dose como alternativa terapêutica para a LV. Entretanto, novos estudos são necessários a fim de avaliar outras combinações entre produtos naturais e drogas convencionais, além estabelecer a dose terapêutica ideal e a toxicidade da combinação eugenol +anfotericina b, visando propor um novo esquema terapêutico para a LV.
Abstract: Visceral leishmaniasis (VL) is a neglected disease, caused by protozoa of the genus Leishmania, closely linked to poverty. It is also the second parasitic disease that kills the most in the world. Treatment is the main form of VL control, however, it has several limitations: it is prolonged, presents toxicity and high cost, among others. The selection of parasites resistant to available medications is also another important limitation, especially in some countries, such as Brazil. Thus, there is a need to implement new therapeutic strategies for the treatment of VL, such as repositioning and drug association, which have proven to be very important tools in the management of several diseases, such as HIV, malaria and cancer. Natural products have always been present in the search for new treatment alternatives and new drugs. The present study aimed to evaluate the action of natural products bisabolol, eugenol and lapachol, with antileishmania activity described in the literature, in combination with amphotericin b, reference drug, in vitro and in vivo models of VL. The inhibitory concentration (IC50) and cytotoxic concentration (CC50) of each drug were calculated and the therapeutic indices (IT) were determined. Next, the interaction of the combinations between natural products and amphotericin b in Leishmania infantum promastigotes was performed. The results were analyzed by the fixed proportion isobologram method, and fractional inhibitory concentrations (CIF) were analyzed; The sum of CIF (ΣCIF) and the mean ΣCIF (XΣCIF) were calculated for each combination. The nature of the interactions was classified according to the mean of XΣCIF. The combination of eugenol and bisabolol with amphotericin b showed XΣCIF values that indicated additive or indifferent interaction. Due to promising results in the in vitro assays, eugenol was selected for evaluation of association with amphotericin b in vivo. In this trial, BALB/c mice with VL were randomly assigned to five groups (n = 6) and treated (i) intraperitoneally (ip) with amphotericin b 5 mg/kg/48h/10 days (standard dose); (ii) amphotericin b at the dose of 1mg/kg/24h/10 days (subdose) ip; (iii) eugenol 75mg/kg/24h/10 days orally; with the combination of amphotericin b 1mg/kg/24h/10 days / ip and eugenol 75mg/kg/24h/10 days orally (iv), and a control group without treatment (v). After treatment, the animals were euthanized and the parasite burden of the liver and spleen determined by qPCR. There was a significant reduction in parasite load in the spleen (p <0.05) and liver (p <0.01) of the animals treated with the combination of eugenol and amphotericin b sub-dose compared to the untreated control group. Surprisingly, the impact on reducing the parasite burden on the organs of mice provided by the combination of eugenol + amphotericin b was similar to that induced by standard treatment with amphotericin b, which used a 5-fold higher dose of the drug than used in the combination. The results suggest that the combination eugenol + amphotericin b had an additive or synergic effect in a murine VL model. In conclusion, this paper proposes the association between the natural product eugenol and the reference drug amphotericin b in sub-dose as a therapeutic alternative for VL. However, further studies are needed to evaluate other combinations of natural products and conventional drugs, as well as to establish the optimal therapeutic dose and toxicity of the combination eugenol + amphotericin b, in order to propose a new therapeutic regimen for VL.
Keywords: Leishmaniose visceral
Sinergismo
Produtos naturais
Eugenol
Bisabolol
Lapachol
Anfotericina b
Associação fármacos
Visceral leshmaniasis
Synergism
Natural productd
Leishmaniasis
Amphotericin b
Drug association
Imunologia
Doenças parasitárias
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::PARASITOLOGIA
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Program: Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
Quote: DIAS, Eliane Martins Ferreira Abdias. Associação de produtos naturais e anfotericina b para o tratamento da leishmaniose visceral. 2018. 45 f. Dissertação (Mestrado em Imunologia e Parasitologia Aplicadas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2018. Disponível em: http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2018.861
Document identifier: http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2018.861
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/24250
Date of defense: 18-May-2018
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