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ORCID:  http://orcid.org/0000-0003-2138-5467
Tipo do documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso Aberto
Título: Proteômica comparativa das cepas 9a5c e fb7 de xylella fastidiosa
Título(s) alternativo(s): Comparative proteomics of strains 9a5c and fb7 from xylella fastidiosa
Autor(es): Souza, Jessica Brito de
Primeiro orientador: Nascimento, Rafael
Primeiro membro da banca: Souza, Hebréia Oliveira Almeida
Segundo membro da banca: Zaini, Paulo Adriano
Resumo: Xylella fastidiosa é uma bactéria Gram-negativa e não flagelada responsável por colonizar o xilema de várias plantas cultivadas e selvagens encontradas em todo o mundo. Nas últimas décadas, tem sido bem estudada devido à importância deste fitopatógeno como agente causador de duas principais doenças, a Clorose Variegada dos Citros (CVC), no Brasil e na Argentina, e a Doença de Pierce (PD) nos Estados Unidos. Algumas cepas de X.fastidiosa têm seus genomas completamente ou parcialmente elucidados, como: 9a5c, isolado de laranja no estado de São Paulo e a cepa Fb7, isolada da laranja na região de Corrientes na Argentina. Baseando-se na análise genômica entre 9a5c e Fb7, e também na importância de uma lipase/esterase na patogenicidade de X.fastidiosa, o objetivo deste trabalho foi analisar e identificar os fatores associados à patogenicidade e virulência de X.fastidiosa 9a5c e Fb7. A fim de visualizar a presença de LesA nas amostras de proteínas totais e secretadas das cepas 9a5c e Fb7, testes esterásico e lipásico foram realizados. A atividade lipásica foi analisada cultivando a bactéria em meio de cultura suplementado com 1% de tributirina. Este teste demonstrou atividade sob os triacilgliceróis de cadeia curta presentes no meio e pode ser visualizado pela maior formação do halo na cepa Fb7. A atividade de esterase, determinada pelo substrato 4-metilumbelliferilbutirato (4-MUB), apresentou valores significativos e claramente expressos. Assim, a estirpe Fb7 apresentou atividade consideravelmente maior quando comparada com 9a5c. Em busca de outros fatores de virulência, foi realizado uma cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa (LC-MS/MS) das proteínas totais das culturas de X.fastidiosa de ambas as cepas. Nesta análise, foi possível identificar 119 proteínas diferencialmente expressas. Dentre elas, algumas proteínas com funções associadas a virulência da bactéria foram superexpressas na cepa Fb7, comparado a cepa 9a5c. A análise de RT-qPCR permitiu validar a expressão de algumas dessas proteínas. Os resultados demonstraram que a LesA e outras proteínas com níveis de expressão superior em Fb7, desempenham um importante papel de patogenicidade nesta cepa. Dessa forma, são fatores que podem explicar a maior virulência da cepa Fb7 quando comparado a cepa 9a5c.
Abstract: Xylella fastidiosa is a gram-negative and non-flagellate bacterium that colonizes the xylem of various cultivated and wild plants worldwide. In the last decades, it has been well studied due to the importance of this phytopathogen as the causing agent of two major diseases, Citrus Variegated Chlorosis (CVC) in Brazil and Argentina, and Pierce Disease (PD) in the United States. Some strains of X.fastidiosa have their genomes completely or partially elucidated, such as 9a5c, isolated from orange in the state of São Paulo, and the strain Fb7, isolated from orange in the region of Corrientes in Argentina. Based on the genomic analysis between strains 9a5c and Fb7, and on the importance of a lipase/esterase in the pathogenicity of X.fastidiosa, the objective of this work was to analyze and identify the factors associated with the pathogenicity and virulence of X.fastidiosa strain 9a5c and Fb7. To visualize the presence of LesA in the total and secreted protein samples of strains 9a5c and Fb7, esterase and lipase tests were performed. Lipase activity was analyzed by culturing the bacteria in culture medium supplemented with 1% tributyrin. This test demonstrated activity under the short chain triacylglycerols present in the medium and can be visualized by the increased halo formation in the Fb7 strain. The esterase activity, determined by the substrate 4-methylumbelliferylbutyrate (4-MUB), showed significant and clearly expressed values. Hence, the Fb7 strain showed considerably higher activity when compared to 9a5c. In search for virulence factors, a liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS / MS) of the total proteins of the X.fastidiosa cultures of both strains was performed. In this analysis, it was identified 119 differentially expressed proteins. Among them, some proteins with functions associated with bacterial virulence were overexpressed in Fb7 strain, compared to 9a5c strain. The RT-qPCR analysis allowed to validate the expression of some of these proteins. The results showed that LesA and other proteins with higher levels of expression in Fb7 play an important pathogenicity role in this strain. Thus, they are factors that may explain the greater virulence of Fb7 strain when compared to strain 9a5c.
Palavras-chave: Fitopatógeno
Virulência
Lipase
Phytopathogen
Virulence
Genética
Fitopatologia
Vírus de plantas
Área(s) do CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA::GENETICA MOLECULAR E DE MICROORGANISMOS
Idioma: por
País: Brasil
Editora: Universidade Federal de Uberlândia
Programa: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
Referência: BRITO-DE-SOUZA, Jessica. Proteômica comparativa das cepas 9a5c e Fb7 de Xylella fastidiosa - Uberlândia.2017. 80 f. Dissertação (Mestrado em Genética e Bioquímica) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2017. DOI http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2018.808.
Identificador do documento: http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2018.808
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/22956
Data de defesa: 31-Jul-2017
Aparece nas coleções:DISSERTAÇÃO - Genética e Bioquímica

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