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Document type: Dissertação
Access type: Acesso Aberto
Title: Imunodiagnóstico da ascaridíase humana: uma nova abordagem sorológica utilizando a tecnologia IgY
Alternate title (s): Immunodiagnosis of human ascariasis: a new serological approach using IgY technology
Author: Lopes, Camila de Almeida
First Advisor: Costa-Cruz, Julia Maria
First member of the Committee: Ferreira Júnior, Álvaro
Second member of the Committee: Nunes, Daniela da Silva
Summary: A ascaridíase humana é uma doença tropical negligenciada de grande relevância para a saúde pública e é considerada a helmintíase mais frequente em regiões pobres. O diagnóstico preciso desta parasitose tem sido um desafio, devido às limitações dos métodos diagnósticos atuais. A tecnologia IgY (imunoglobulina Y) é uma alternativa para a produção de anticorpos de alto rendimento e específicos, e possui várias vantagens, como por exemplo, a manutenção de galinhas é financeiramente acessível, os animais são facilmente manejados, além de ser uma técnica eficaz. Este estudo teve como objetivo produzir, fracionar, purificar, caracterizar e aplicar anticorpos IgY policlonais anti-Ascaris suum no imunodiagnóstico da ascaridíase humana. Cinco imunizações com extrato salino total de adultos de A. suum foram realizadas, em intervalos de 14 dias, em galinhas (Gallus gallus domesticus) da linhagem Isa Brown. Os ovos e as amostras de sangue foram coletados semanalmente e quinzenalmente, respectivamente, para monitorar a produção de anticorpos. As imunoglobulinas IgY, obtidas dos ovos, foram purificadas em coluna de afinidade HiTrap IgY Purification em sistema completo de cromatografia ÄKTA Prime Plus. A especificidade dos anticorpos foi confirmada por dot-blot, SDS-PAGE 12%, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) de cinética, ELISA de avidez, immunoblotting e imunofluorescência indireta. A aplicação no diagnóstico foi realizada através da detecção de imunocomplexos, em amostras de soro humano, por ELISA sanduíche. Picos de produção da IgY anti-A. suum ocorreram nas semanas seis e oito. Os anticorpos apresentaram altos níveis de avidez após a segunda dose de imunização, variando de 64 a 93%, com índice de avidez médio de 78,30%. A IgY purificada reconheceu 12 bandas proteicas do extrato salino de A. suum no ensaio de immunoblotting. Os ovos do parasito, a parte uterina e cutículas de fêmea adulta de A. suum foram reativas na imunofluorescência. A detecção de imunocomplexos mostrou valores diagnósticos de 80% de sensibilidade e 90% de especificidade. Em conclusão, anticorpos IgY parasito-específicos demonstraram ser uma potencial ferramenta imunodiagnóstica, com promissoras aplicações futuras na terapia da ascaridíase humana.
Abstract: Human ascariasis is a neglected tropical disease of great relevance to public health and is considered the most frequent helminthiasis in poor regions. Accurately diagnosing the presence of this parasitosis has been challenging due to limitations of current diagnostic methods. Immunoglobulin Y (IgY) technology is an alternative for the production of highly specific and profitable antibodies with several advantages, i.e. the keeping of chickens is affordable, the animals are easily handled and it is very effective. This study aimed to produce, fractionate, purify, characterize and apply polyclonal IgY antibodies anti-Ascaris suum in the immunodiagnosis of human ascariasis. Five immunisations with total saline extract of A. suum adult life forms were performed at 14-day intervals in hens (Gallus gallus domesticus) of the Isa Brown line. Eggs and blood samples were collected weekly and fortnightly, respectively, to monitor the production of antibodies. IgY immunoglobulin obtained from eggs was purified in a HiTrap IgY Purification affinity column in a complete ÄKTA prime plus chromatography system. The specificity of antibodies was confirmed by dot-blot, SDS-PAGE 12%, kinetic enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), avidity ELISA, immunoblotting and indirect immunofluorescence antibody tests. Application in the diagnosis was performed through detection of immune complexes, in human serum samples, by sandwich ELISA. Peaks of IgY anti-A. suum production occurred at six and eight weeks. The antibodies showed high avidity levels after the second dose of immunisation, ranging from 64% to 93% and a mean avidity index of 78.30%. Purified IgY recognised 12 bands of proteins of A. suum saline extract in the immunoblotting assay. Eggs, the uterine portion and cuticles of A. suum female adult were reactive in immunofluorescence by IgY. The detection of immune complexes showed diagnostic values of 80% sensitivity and 90% specificity. In conclusion, parasite-specific IgY antibodies have been shown to be a potential immunodiagnostic tool with promising future applications in human ascaridiasis therapy.
Keywords: Ascaridíase humana
Human ascariasis
Imunodiagnóstico
Immunodiagnosis
Immunoblotting
Imunofluorescência
Immunofluorescence
Imunocomplexo
Immune complex
Tecnologia IgY
IgY technology
Imunologia
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::PARASITOLOGIA::HELMINTOLOGIA DE PARASITOS
CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Program: Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
Quote: LOPES, Camila de Almeida. Imunodiagnóstico da ascaridíase humana: uma nova abordagem sorológica utilizando a tecnologia IgY. 2018. 69 f. Dissertação (Mestrado em Imunologia e Parasitologia Aplicadas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2018. Disponível em: http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2018.813.
Document identifier: http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2018.813
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/22365
Date of defense: 27-Jul-2018
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