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https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/21436
Document type: | Trabalho de Conclusão de Curso |
Access type: | Acesso Aberto |
Title: | Clonagem e expressão de uma serinoprotease "thrombin-like" em Nicotiana benthamiana |
Alternate title (s): | Cloning and expression of a serine protease thrombin-like in Nicotiana benthamiana |
Author: | Morosini, Letícia Guerra |
First Advisor: | Rodrigues, Renata Santos |
First coorientator: | Nascimento, Rafael |
First member of the Committee: | Rodrigues, Renata Santos |
Second member of the Committee: | Almeida, Hebreia Oliveira de |
Third member of the Committee: | Morais, Tâmara Prado de |
Summary: | A técnica de expressão de proteínas heterólogas em espécies vegetais é muito utilizada no meio científico, sendo uma das metodologias mais utilizadas a transformação transiente do vegetal através da agroinfiltração com a bactéria Rhizobium radiobacter, que, pela presença do plasmídeo Ti em sua estrutura, é capaz de induzir o vegetal a produzir a proteína de interesse. Esse processo resulta em uma produção em larga escala de proteínas de interesse biotecnológico que são encontradas em baixas concentrações in natura. Dentre as proteínas de potencial aplicabilidade biotecnológica e, principalmente, farmacológica, tem-se a classe de enzimas serinoproteases thrombin-like encontradas em peçonhas de serpente como a espécie Bothrops pauloensis tendo aplicabilidade para futuros tratamentos para doenças como infarto do miocárdio, hemorragias, dentre outras aplicabilidades. Portanto, o objetivo desse trabalho foi clonar o gene de uma serinoprotease thrombin-like e expressá-la em Nicotiana benthamiana. A técnica de clonagem realizada foi através da utilização de enzimas digestivas e posterior ligação do gene de interesse ao vetor utilizado no projeto (pEAQ-HT), tendo já inserido nesse vetor o gene de silenciamento gênico do vegetal, não necessitando, portanto, uma coinfiltração. Posteriormente a ligação foi eletroporada nas células de Escherichia coli e R. radiobacter. O projeto resultou na clonagem do gene de interesse em E. coli e R. radiobacter, sendo posteriormente expresso em N. benthamiana, onde ainda não foi possível detectar a expressão da proteína. |
Abstract: | The technique of heterologous protein expression in plant species is widely used in the scientific community. As one of the most used methods of transient transformation in plants being agroinfiltration with the bacteria Rhizobium radiobacter, which has the presence of plasmide Ti in its structure, giving the bacteria the capacity of inducing the vegetable to produce heterologous proteins . This process results in a large-scale production of proteins of biotechnological interest that are found in low concentrations in natura. Among the proteins with potential applicability in biotechnology especially for pharmacological proposes, there is the class of thrombin-like serine protease enzymes, which are found in snake venoms as Bothrops pauloensis species, having applicability for future treatments for diseases such as myocardial infarction, bleeding, among others. Therefore, the aim of this work was to clone the gene of a thrombin-like serinoprotease and express it in Nicotiana benthamiana. The cloning technique performed was through the use of digestive enzymes and subsequent binding of the gene of interest on the vector used in the project (pEAQ-HT), having this vector already a silencing gene of the plant, not requiring therefore a coinfiltration . Subsequently the ligation was electroporated into Escherichia coli and R. radiobacter cells. The project resulted in the cloning of the gene of interest in E. coli and R. radiobacter, with the subsequently expression in N. benthamiana, which has not yet been possible to detect protein expression. |
Keywords: | Plant transformation Agroinfiltration Recombinant protein Transformação vegetal Agroinfiltração Proteína recombinante Prócoagulante |
Area (s) of CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA::GENETICA MOLECULAR E DE MICROORGANISMOS CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA::GENETICA VEGETAL |
Language: | por |
Country: | Brasil |
Publisher: | Universidade Federal de Uberlândia |
Quote: | MOROSINI, Letícia Guerra. Clonagem e expressão de uma serinoprotease thrombin-like em Nicotiana benthamiana. 2017. 37 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Biotecnologia) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2017. |
URI: | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/21436 |
Date of defense: | 19-Dec-2017 |
Appears in Collections: | TCC - Biotecnologia (Uberlândia) |
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