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Document type: Dissertação
Access type: Acesso Aberto
Title: Desenvolvimento da plataforma de grafite funcionalizada com poli(ácido-4hidroxifenilacético) sobre óxido de grafeno reduzido: nanopartículas de ouro, para detecção do hormônio triiodotironina
Alternate title (s): Development of the functionalized graphite platform with poly (4-hydroxyphenylacetic acid) on reduced graphene oxide - gold nanoparticles for the detection of the hormone triiodothyronine
Author: Segatto, Mônica Silva
First Advisor: Madurro, João Marcos
First coorientator: Madurro, Ana Graci Brito
First member of the Committee: Mulato, Marcelo
Second member of the Committee: Melo, Edmar Isaias de
Summary: Biossensores apresentam diversas vantagens como elevada sensibilidade, detecção em tempo real, volume reduzido de amostra e baixo custo, que os tornam uma ferramenta muito versátil no diagnóstico mais específico de doenças e distúrbios metabólicos. Essa pesquisa teve como objetivo principal o desenvolvimento de um imunossensor eletroquímico para o diagnóstico do hormônio tireoidiano triiodotironina - T3, a partir de uma plataforma construída por modificação de eletrodos de grafite com o filme polimérico do ácido 4-hidroxifenilacético [poli(4-HFA)] sobre o nanocompósito preparado com o óxido de grafeno reduzido e nanopartículas de ouro (OGR-AuNP). OGR foi sintetizado em laboratório pelo método de oxidação-esfoliação-redução química, partindo do grafite e foi incorporado na superfície de eletrodos de grafite por adsorção física. AuNP foram sintetizadas eletroquimicamente sobre o eletrodo contendo OGR formando um nanocompósito. O poli(4-HFA) foi eletropolimerizado sobre o nanocompósito e, sobre ele foi imobilizada a biomolécula sonda de Anti-T3 por ligação covalente. Moléculas bloqueadoras (glicina) foram adicionadas antes do contato com o alvo T3. Medidas de detecção foram obtidas por voltametria de pulso diferencial e espectroscopia de impedância eletroquímica. Caracterizações por espectroscopia na região do infravermelho evidenciam a redução de grupos oxigenados no OGR, resultantes do processo de síntese, enquanto imagens de microscopia de força atômica e microscopia eletrônica de varredura revelam a morfologia característica de folhas mais agrupadas. A incorporação de OGR e, posterior eletrodeposição de AuNP sobre a superfície de eletrodos de grafite mostra um aumento significativo na condutividade elétrica e transferência eletrônica do mesmo, além de facilitarem o processo de eletropolimerização do filme poli(4-HFA). Este nanocompósito leva a formação de uma maior quantidade do filme poli(4-HFA), realçando a presença de três pares redox. Esta maior quantidade de filme formada aumenta a probabilidade de imobilização de biomoléculas. Os melhores resultados no processo de imobilização de Anti- T3 por ligação covalente e interação com o alvo T3 foram obtidos com a concentração de 1 e 2 pg mL-1, respectivamente. Os resultados obtidos por espectroscopia de impedância eletroquímica corroboram as demais análises, comprovando o aumento da resistência a cada etapa de construção do imunossensor. A caracterização morfológica do imunossensor apresenta alterações significativas nos valores de rugosidade, concordantes com os estudos eletroquímicos. Detecções de diluições do Alvo T3 mostram que o imunossensor proposto tem limite de detecção inferior a 2,0 10- g mL- , sendo possível a construção de uma curva analítica de concentração de T3 na ordem de 1,0 a 5,0 pg mL-1, que aumenta a expectativa de aplicação em amostras reais de pacientes, por incluir a faixa de concentração de T3 presente no sangue.
Abstract: Biosensors show many advantages such as high sensitivity, possibility of point of care detection, small sample volume and low cost, which makes them a versatile tool for the specific diagnosis of diseases and metabolic disorders. This research had as main objective the development of an electrochemical immunosensor for the diagnosis of the thyroid hormone triiodothyronine - T3, in a platform constructed by modifying graphite electrodes with the 4-hydroxyphenylacetic acid polymeric film [poly(4-HPA)] onto a nanocomposite prepared with reduced graphene oxide and gold nanoparticles (RGO-AuNP). RGO was synthesized in laboratory by the oxidation-exfoliation-chemical reduction method, starting from the graphite, and was incorporated into the surface of graphite electrodes by physical adsorption. AuNP were synthesized electrochemically onto electrode containing RGO forming a nanocomposite. The poly(4-HPA) was electropolymerized onto the nanocomposite, and on that the probe biomolecule Anti-T3 was immobilized by covalent bond. Glycine was used as blocking molecules prior to the contact with target T3. The detection measures were obtained by differential pulse voltametry and electrochemical impedance spectroscopy. Characterizations by infrared spectroscopy show the reduction of oxygens groups in RGO, resulting from the synthesis process, while atomic force microscopy and scanning electron microscopy images reveal the characteristic morphology of the more grouped sheets. The incorporation of RGO and the AuNP electrodeposition onto the surface of graphite electrodes show a significant increase in electrical conductivity and electron transfer, besides facilitating the electropolymerization process of poly(4-HPA). The combination of this nanocomposite with poly(4-HPA) leads to the formation of a larger amount of film, highlighting the presence of three redox pairs. This greater amount of film formed increases the probability of immobilization of biomolecules. The best results in Anti-T3 immobilization process by covalent bond and with target T3 interaction are obtained with 1 e 2 pg mL-1 concentration, respectively. The results obtained by electrochemical impedance spectroscopy corroborate with the other analysis, proving the increase in resistance at each stage of imunossensor development. The morphological characterization of the immunosensor shows significant changes in roughness values that are concomitant with the explanations of the results in electrochemical study. Dilution detections of Target T3 show that the proposed immunosensor has a detection limit less than 2 10- g mL- , it being possible to construct an analytical curve of T3 concentration in the order of 1.0 to 5.0 pg mL-1, increasing the prospect of application in real samples of patients, since it include the T3 concentration range present in the blood.
Keywords: Química
Nanopartículas
Triiodotironina
Voltametria
Triiodotironina - T3
Imunossensores
Óxido de grafeno reduzido
Nanopartículas de ouro
Ácido 4-hidroxifenilacético
Triiodothyronine - T3
Immunosensors
Reduced graphene oxide
Gold nanoparticles
4-hydroxyphenylacetic acid
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICA
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Program: Programa de Pós-graduação em Química
Quote: SEGATTO, Mônica Silva. Desenvolvimento da plataforma de grafite funcionalizada com poli(ácido 4hidroxifenilacético) sobre óxido de grafeno reduzido: nanopartículas de ouro, para detecção do hormônio triiodotironina. 2017. 113 f. Dissertação (Mestrado em Química) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2017. DOI http://doi.org/10.14393/ufu.di.2017.446
Document identifier: http://doi.org/10.14393/ufu.di.2017.446
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/21370
Date of defense: 21-Jul-2017
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