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metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Identificação molecular de espécies de micobactérias por PCR-RFLP hsp65 e implicações clínicas do diagnóstico convencional
metadata.dc.creator: Riello, Fabiane Nunes
metadata.dc.contributor.advisor1: Goulart, Isabela Maria Bernardes
metadata.dc.contributor.advisor-co1: Goulart Filho, Luiz Ricardo
metadata.dc.contributor.referee1: Röder, Denise Von Dolinger de Brito
metadata.dc.contributor.referee2: Neves, Adriana Freitas
metadata.dc.description.resumo: Introdução: O estabelecimento do regime terapêutico para micobacterioses depende da identificação precisa da espécie de micobactéria, sendo que a falha no diagnóstico pode resultar em tratamento inadequado e aumento da taxa de mortalidade dos pacientes. A diferenciação entre espécies de micobactérias tem sido feita por meio de testes convencionais que analisam características fenotípicas e bioquímicas após um longo período de cultura. O diagnóstico molecular de micobactérias permite a rápida detecção e identificação das espécies, embora não esteja disponível nos programas de saúde pública. Objetivo: Padronizar o uso da técnica molecular PCR-RFLP hsp65 na identificação de espécies de micobactérias, testar esse método em amostras de cultura de pacientes diagnosticados com micobacterioses, comparando com as técnicas convencionais e determinar as implicações clínicas do da falha no diagnóstico baseado na sintomatologia, cultura e baciloscopia. Metodologia: A técnica de PCR-RFLP hsp65 foi padronizada em amostras já identificadas em centros de referência e posteriormente testadas em 55 amostras de cultura provenientes de pacientes com micobacterioses ocorridas em 2013 e 2014, comparando os resultados com o diagnóstico clínico. Resultados: Todos os pacientes foram diagnosticados por método convencional como tuberculose, mas apenas 63,7% (35/55) das amostras de cultura foram confirmadas como M. tuberculosis pela PCR-RFLP e o restante, 36,3% (20/55) dos pacientes foram diagnosticados por método molecular como micobactérias atípicas. A PCR-RFLP hsp65 identificou 32,7% (18/55) amostras positivas para micobactérias não tuberculosas (M avium tipo 1, M. avium tipo 2, M. kansasii tipo 1, M. intracellulare tipo 1, M. mucogenicum, M. chelonae, M. terrae tipo 3 e uma sem padrão conhecido na literatura) e 3,7% (2 amostras) foram negativas. Quanto ao tratamento, apenas 11% (6/55) tiveram tratamento substitutivo no caso de falha do tratamento padrão e suspeita ou confirmação de infecção por micobactéria atípica. Conclusão: A PCR-RFLPhsp65 diferenciou o complexo tuberculose das micobactérias não-tuberculosas classificando-as em nível de espécie, demonstrando ser discriminatório, rápido e econômico. A identificação da espécie em infecções micobacterianas é imprescindível para a escolha do esquema terapêutico correto e o uso dessa técnica poderá auxiliar os programas de saúde pública aumentando a precisão nos diagnósticos e diminuindo os tratamentos inadequados.
Abstract: Introduction: The establishment of the therapeutic regimen for mycobacteriosis depends on the accurate identification of the species of mycobacteria and the misdiagnosis can result in inappropriate treatment and increased mortality rate of patients. Differentiation between mycobacterial species has been made by conventional tests that analyze phenotypic and biochemical characteristics after a long culture period. The molecular diagnosis of mycobacteria allows fast detection and identification of the species, although it is not available in public health programs. Objective: To standardize the use of molecular technique PCR-RFLPhs^65 in species identification of mycobacteria, test method in culture samples from patients diagnosed with mycobacteriosis compared to the conventional techniques and to determine the clinical implications of erroneous diagnosis based on symptoms, culture and bacilloscopy. Methodology: The PCR-RFLP hsp65 technique was standardized in samples already identified in reference centers and subsequently tested in 55 culture samples from patients with mycobacterial infections occurred in 2013 and 2014, comparing the results with the clinical diagnosis. Results: All patients were clinically diagnosed with tuberculosis, but only 63.7% (35/55) of culture samples were confirmed as M. tuberculosis by PCR-RFLP and the rest, 36.3% (20/55) of the patients were diagnosed by molecular method as atypical mycobacteria The molecular method identified 18 positive samples (32.7%) for nontuberculous mycobacteria (M avium type1, M. avium type 2, M. kansasii type1, M. intracellulare type 1, M. mucogenicum, M. chelonae, M. terrae type 3 and one NTM without pattern known in literature) and 3.7% (2 samples) were negative. Concerning to the treatment only 11% (6/55) had substitute treatment in the case of failure of the standard treatment and suspected or confirmed infection with atypical mycobacteria. Conclusion: PCR-RFLPhs^65 differentiated complex tuberculosis of non-tuberculous mycobacteria classifying them at the species level, showed be discriminatory, fast and economical. Species identification in mycobacterial infections is essential to choose the correct therapeutic regimen and the use of this technique for diagnosis can assist public health programs increasing accuracy in diagnostic and reducing inappropriate treatment.
Keywords: Ciências médicas
Diagnóstico molecular
Tuberculose - Diagnóstico
Micobacterias
PCR-RFLP
Molecular diagnosis
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::MEDICINA
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde
Citation: RIELLO, Fabiane Nunes. Identificação molecular de espécies de micobactérias por PCR-RFLP hsp65 e implicações clínicas do diagnóstico convencional. 2015. 95 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2015.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/18410
Issue Date: 24-Feb-2015
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Ciências da Saúde

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