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metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Avaliação da importância a da produção de ROS e do eixo de controle da liberação de cálcio na osteoclastogênese
metadata.dc.creator: Ribeiro, Mariana Soares Pena
metadata.dc.contributor.advisor1: Silva, Marcelo José Barbosa
metadata.dc.contributor.advisor-co1: Oliveira, Ana Paula de Lima
metadata.dc.contributor.referee1: Rezende, Taia Maria Berto
metadata.dc.contributor.referee2: Silva, Alberto Moraes da
metadata.dc.description.resumo: Espécies ativas de oxigênio (ROS) são produzidas por um complexo enzimático denominado NADPH oxidase (NOX) que é capaz de reduzir o oxigênio utilizando o NADPH como substrato. Sabe-se que ROS estão envolvidas na diferenciação de osteoclastos. Para avaliar a influência de NOX2 e ROS na formação de osteoclastos foi utilizado o tratamento com Apocinina (APO) como inibidora de NOX2 (isoforma 2 de NADPH) e a N-acetil-cisteína (NAC) como redutora dos níveis de ROS intracelular. A oscilação de Ca2+ também é importante nos momentos finais da formação de osteoclastos e foi analisado se NOX2 e ROS estavam envolvidas nesse mecanismo. Os resultados demonstraram que o tratamento com APO reduziu o número de células TRAP positivas e a expressão de TRAP, o que sugere que a redução do número de osteoclastos está relacionada com a diminuição de TRAP. No entanto, o tratamento com NAC não reduziu o número de TRAP-positivas além de aumentar a expressão de TRAP. Ademais, acredita-se que a osteoclastogênese é dependente de NOX2 por outras vias além da produção de ROS e da expressão de RANK, vias que foram alteradas tanto pelo tratamento com APO quanto com NAC, porém com impacto diferente no número de osteoclastos. Na via EEIG1 observou-se que o tratamento com APO reduziu a expressão dessa via, enquanto que o tratamento com NAC aumentou essa expressão. Dessa forma, comprova-se que NOX2 reduz a osteoclastogênese de modo ainda não conhecido. A vias ERK1 e TPC2 apresentaram um comportamento bifásico com relação aos tratamentos. Por outro lado, hipotetizamos que o tratamento com NAC retardaria ou inibiria de forma tardia a osteoclastogênese, além de sugerirmos que a participação de NOX2 na formação de osteoclastos não estaria relacionada apenas com a produção de ROS. Com isso, nós também sugerimos que a participação das vias RANKL/RANK/NOX2/ROS quanto RANKL/RANK/N OX2/Rac 1/PLCy1 são importantes para a osteoclastogênese, sendo que apenas uma destas não é suficiente para a osteoclastogênese. Nos tratamentos com APO e NAC em CMO obtivemos uma redução da área dos osteoclastos, assim como também foi observada a redução da expressão de DC-STAMP. Conclui-se que NOX2 participa do processo de osteoclastogênese em várias vias de sinalização e está relacionada além da produção de ROS e outros processos ainda não conhecidos, porém imprescindíveis para diminuírem a formação de osteoclastos.
Abstract: Species active oxygen (ROS) are produced by an enzyme complex called NADPH oxidase (NOX) which is able to reduce oxygen using NADPH as the substrate. It is known that ROS are involved in the differentiation of osteoclasts. To evaluate the influence of NOX2 and ROS on osteoclast formation, Apocynin (APO) was used as a NOX2 inhibitor (NADPH isoform 2) and N-acetyl-cysteine (NAC) as a reductant of intracellular ROS levels. The oscillation of Ca is also important in the final moments of osteoclast formation and it was analyzed if NOX2 and ROS were involved in this mechanism. The results demonstrated that treatment with APO reduced the number of TRAP cells positive and the expression of TRAP, which suggests that the reduction of the number of osteoclasts is related to the decrease of TRAP. However, treatment with NAC didn’t reduce the number of TRAP-positive in addition to increasing the expression of TRAP. In addition, it is believed that osteoclastogenesis is dependent on NOX2 by other pathways besides ROS production and RANK expression, pathways that were altered by both APO and NAC, but with a different impact on the number of osteoclasts. In the EEIG1 pathway, it was observed that the APO treatment reduced the expression of this pathway, whereas the treatment with NAC increased this expression, thus it was verified that NOX2 reduces osteoclastogenesis in a way not yet known. The ERK1 and TPC2 pathways presented a biphasic behavior in relation to the treatments. On the other hand, we hypothesized that treatment with NAC would delay or inhibit late osteoclastogenesis, in addition to suggesting that the participation of NOX2 in the formation of osteoclasts would not be related only to the production of ROS. Therefore, we also suggest that the participation of the RANKL/RANK/NOX2/ROS pathways as RANKL/RANK/NOX2/Rac1/PLCy1 are important for osteoclastogenesis, with only one of these being insufficient for osteoclastogenesis. In the treatments with APO and NAC in BMC we obtained a reduction of the area of the osteoclasts, as well as the reduction of the expression of DC-STAMP. It is concluded that NOX2 participates in the process of osteoclastogenesis in several signaling pathways and is related in addition to the production of ROS and other processes not yet known, but essential to decrease the formation of osteoclasts.
Keywords: Imunologia
Ossos - Doenças
Oxigênio ativo no organismo
Ossos - Crescimento
Osteoclasto
Apocinina
NAC
RANK
ROS
TRAP
NADPH
Osteoclasts
Apocynin
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
Citation: RIBEIRO, Mariana Soares Pena. Avaliação da importância a da produção de ROS e do eixo de controle da liberação de cálcio na osteoclastogênese. 2016. 34 f. Dissertação (Mestrado em Imunologia e Parasitologia Aplicadas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2016.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/18214
Issue Date: 24-Oct-2016
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Imunologia e Parasitologia Aplicadas

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