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Document type: Tese
Access type: Acesso Embargado
Title: Anti-BpMP-I: produção e caracterização de anticorpos policlonais IgY e IgG anti-metaloprotease
Author: Souza, Dayane Lorena Naves de
First Advisor: Ávila, Veridiana de Melo Rodrigues
First member of the Committee: Borges, Márcia Helena
Second member of the Committee: França, Johara Boldrini
Third member of the Committee: Nascimento, Rafael
Fourth member of the Committee: Barbosa, Bellisa de Freitas
Summary: BpMP-I é uma metaloprotease não hemorrágica e fibrinogenolítica isolada da peçonha de B. pauloensis. No presente trabalho, foi investigada a reatividade cruzada de anticorpos policlonais anti-BpMP-I (IgG e IgY) isolados a partir do soro de camundongos (Balb-C) e da gema do ovo de galinhas (White Leghorn). Os anticorpos foram utilizados para detectar antígenos potenciais nas peçonhas para o enriquecimento do soro antiofídico. Posteriormente, os anticorpos anti-BpMP-I (IgG e IgY) foram acoplados à colunas de afinidade para o isolamento de proteínas alvo. As proteínas ligantes à anti-BpMP-I (IgG-Sepharose e IgY-Sepharose) foram submetidas às análises de eletroforese 2D e espectrometria de massa em MALDI TOF/ TOF. Os anticorpos anti BpMP-I também foram utilizados para identificar metaloproteases no secretoma de linhagem primária de câncer de mama (MACL-1). Inicialmente, os resultados de reatividade específica contra BpMPI confirmaram a eficácia da imunização e mostraram uma intensa reatividade cruzada entre as peçonhas de B. pauloensis, B. jararaca, B. diporus e B. atrox. Nenhuma reatividade cruzada foi detectada para a peçonha de Crotalus durissus collilineatus e a fosfolipase A2 (BnSP7), que foi utilizada como antígeno negativo. Os anticorpos foram eficientes em inibir as atividades azocaseinolítica e hemorrágica da BpMP-I e da peçonha de B. pauloensis, respectivamente, confirmando o seu potencial de neutralização. Aproximadamente, 20 (específico para IgY) e 23 (específico para IgG) spots foram detectadas em 2D SDS-PAGE, e somente 11 spots foram sequenciados, identificando principalmente metaloproteases da classe PIII e domínios lectina tipo-C. Além disso, os anticorpos anti-BpMP-I foram capazes de reconhecer proteínas na faixa de 72 kDa presentes no secretoma de linhagem primária de câncer de mama (MACL-1), provavelmente, a MMP-2, uma metaloprotease altamente expressa em uma variedade de células malignas, tais como câncer de mama. Analisados em conjunto, os nossos resultados mostraram que os anticorpos policlonais anti-BpMP-I foram capazes de reconhecer metaloproteases em diferentes peçonhas e no secretoma de células de câncer de mama, sugerindo a sua utilização como candidatos potenciais para inclusão no soro antiofídico ou tratamento e diagnóstico do câncer.
Abstract: BpMP-I is a non-hemorrhagic metalloprotease isolated and fibrinogenolytic the venom of B. pauloensis. In the present work , we investigated the cross-reactivity of polyclonal anti-BPMP-I (IgG and IgY) isolated from the serum of mice (Balb-C) and chicken egg yolk (White Leghorn). The antibodies were used to detect potential antigens in venoms for enrichment of antivenom. Subsequently, the anti-BPMP-I antibodies (IgG and IgY) were coupled to affinity columns for isolation of target proteins. Proteins binding to the anti-BPMP-I (IgY and IgG-Sepharose Sepharose) were subjected to 2D electrophoresis analysis and mass spectrometry MALDI TOF / TOF. The BPMP-I antibodies were also used to identify metalloproteinases in secretome primary line of breast cancer (MACL-1). Initially, the results of specific reactivity against BpMPI confirmed the efficacy of immunization and showed a strong cross reactivity between the venom of B. pauloensis, B. jararaca, B. and B. atrox diporus. No cross reactivity was detected in the venom of Crotalus durissus collilineatus and phospholipase A2 (BnSP7), which was used as a negative antigen. The antibodies were effective in inhibiting the azocaseinolítica and hemorrhagic activities BPMP-I and the venom of B. pauloensis respectively, confirming its potential neutralization. Approximately, 20 (specific for IgY) and 23 (specific for IgG) were detected spots on 2D SDS-PAGE, and only 11 spots were sequenced by identifying mainly metalloproteases PIII class and type-C lectin domains. Furthermore, the anti-BPMP-I antibodies were capable of recognizing proteins in the range of 72 kDa present in secretome primary line of breast cancer (MACL-1), probably, MMP-2, a highly expressed metalloprotease in a variety of malignant cells such as breast cancer. Taken together, our results showed that anti-BPMP-I polyclonal antibodies were able to recognize metalloproteases in different venoms and secretome breast cancer cells, suggesting their use as potential candidates for inclusion in antiophidic or treating and diagnosis of cancer.
Keywords: Bioquímica
Metaloproteínas
Anticorpos
Metaloproteinase
Metaloprotease
IgY
IgG
BpMP-I
Antiofídico
Metalloproteinase
Metalloprotease
Antibodies
Antiophidic
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Univerdade Federal de Uberlândia
Program: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
Quote: SOUZA, Dayane Lorena Naves de. Anti-BpMP-I: produção e caracterização de anticorpos policlonais IgY e IgG anti-metaloprotease. 2015. 120 f. Tese (Doutorado em Genética e Bioquímica) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2015.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/17581
Date of defense: 13-Nov-2015
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