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Document type: Dissertação
Access type: Acesso Aberto
Title: Clonagem e expressão de um antígeno quimérico contendo segmentos das glicoproteínas e1 e e2 do envelope do vírus da hepatite C
Author: Froelich, Loiane
First Advisor: Yokosawa, Jonny
First member of the Committee: Borges, Lizandra Ferreira de Almeida e
Second member of the Committee: Domingues, André Luiz da Silva
Summary: Aproximadamente 150 milhões de pessoas estão infectadas cronicamente pelo vírus da hepatite C (HCV). O desenvolvimento de vacinas tem sido dificultado pela variabilidade genética do vírus, bem como pela falta de modelos animais apropriados. Neste estudo, é descrita a construção de um antígeno artificial contendo segmentos das glicoproteínas E1 e E2 do HCV, expresso em sistema bacteriano fundido com a enzima glutationa S-transferase (GST-E1E2). Estes segmentos foram selecionados pela sua capacidade de induzir anticorpos neutralizantes, descrita em artigos científicos. A imunogenicidade da GST-E1E2 foi avaliada por meio de inoculação da proteína em camundongos e testando-se o soro desses animais por ELISA contra quatro peptídeos sintéticos (I a IV) correspondentes a segmentos presentes na sequência de E1E2. Foi observada reatividade estatisticamente significante somente contra os peptídeos I, II e IV em comparação entre os soros do grupo imunizado com GST-E1E2 e daquele imunizado com GST. O soro que mostrou ter a maior reatividade por ELISA foi utilizado em imunofluorescência indireta (IFI) contra células CHO-K1 transfectadas com o plasmídeo EFJFH c-NS2, que expressa as proteínas estruturais do HCV, e também mostrou ser reativo, confirmando que o observado por ELISA foi específico. Esses resultados indicam que alguns dos segmentos presentes na sequência E1E2 e analisados neste estudo foram capazes de induzir a produção de anticorpos contra o HCV.
Abstract: Approximately 150 million people are infected chronically with hepatitis C virus (HCV). The development of vaccines has been hampered by the high genetic variability of the virus as well as by the lack of suitable animal models. In this study, we describe the construction of an artificial antigen containg segments of the HCV glicoproteins E1 and E2, expressed in bacterial system as a fusion protein (GST-E1E2), six and eight residues of histidine (6xhis and 8xHis). These segments we were selected by their ability to elicit neutralizing antibodies, described in scientific articles. Immunogenicity of GST-E1E2 was assessed by means of inoculation of mice and testing protein in the serum of these animals by ELISA against four synthetic peptides (I to IV) corresponding to segments E1E2 present in the sequence. Statistically significant reactivity was observed only against peptides I, II and IV compared between sera of immunized group and that GST-E1E2 immunized with GST. The serum was shown to have the highest reactivity by ELISA was used in indirect immunofluorescence (IFI) against CHO-K1 cells transfected with plasmid EFJFH c-NS2, which express the structural proteins of HCV, and also shown to be reactive, confirming that the observed ELISA was specific. These results indicate that some of the segments E1E2 present in the sequence and analyzed in this study were able to induce the production of antibodies against HCV.
Keywords: Vírus da hepatite C
Glicoproteínas E1 e E2
Imunogenicidade
Proteína recombinante
Hepatitis C virus
Glycoproteins E1 and E2
Immunogenicity
Recombinant protein
Hepatite C
Glicoproteínas
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA
Language: por
Country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Institution Acronym: UFU
Department: Ciências Biológicas
Program: Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
Quote: FROELICH, Loiane. Clonagem e expressão de um antígeno quimérico contendo segmentos das glicoproteínas e1 e e2 do envelope do vírus da hepatite C. 2014. 47 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2014.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/16706
Date of defense: 29-May-2014
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Imunologia e Parasitologia Aplicadas

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