Publicação: Variabilidade genotípica dos isolados de Giardia duodenalis em diferentes espécies de animais
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CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA
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Giardia duodenalis é parasito do intestino delgado de várias espécies de mamíferos,
incluindo o homem, tendo distribuição mundial. Entre os animais, domésticos e
silvestres é prevalente, independente da raça, sexo, idade e aptidão, com importância
clínica e econômica. Durante muito tempo, foi considerado específico para a espécie de
hospedeiro onde era encontrado, porém recentemente descobriu-se a existência de
relação de especificidade entre o grupo genotípico ou assemblage do parasito e seu
hospedeiro. Baseado nisso, atualmente, a Giardia duodenalis é considerada um
complexo, sendo a caracterização molecular, de isolados do parasito, de fundamental
importância para o entendimento da transmissão da giardíase. Resultados inconsistentes
têm sido identificados quando diferentes loci são sequenciados. Por isso a genotipagem
multilocus torna-se a principal aliada na atribuição fidedigna das assemblages e
subassemblages aos isolados. O objetivo desse trabalho foi caracterizar molecularmente
os cistos de Giardia duodenalis, procedentes de cães, bovinos, ovinos e suínos
provenientes de propriedades rurais, canis, pet shops e granjas da microrregião de
Uberlândia, utilizando-se quatro marcadores. Para a determinação de positividade para
cistos de G. duodenalis foi utilizada a técnica de Centrífugo-Flutuação em Sulfato de
Zinco a 33%. Para a genotipagem dos isolados utilizou-se os genes glutamato
dehidrogenase (gdh), triose fosfato isomerase (tpi), β-giardin (bg) e SSU-rRNA. Foram
observados cistos de G. duodenalis em cães, bovinos, suínos e ovinos e as taxas de
infecção foram 21,66%, 18,75%, 5.5% e 24, 8%, respectivamente. Na associação entre
positividade e sexo, faixa etária, raça e aptidão a faixa etária foi a única variável que
apresentou significância estatística em relação à infecção. Fragmentos do gene gdh
foram amplificados em 33,3% das amostras, do tpi em 36,8% e do bg em 7,2%. A
PCR falhou em amplificar e sequenciar amostras do gene alvo SSU-rRNA. Foram
obtidas ao todo 70 sequencias, sendo 34 (48,6%) do gdh, 25 (35,7%) do tpi e 11
(15,7%) do bg. Observou-se predominância de assemblages espécie-específicas no
sequenciamento dos três genes, sendo o tpi o único gene que classificou isolados como
assemblage zoonótica; Foram observadas amostras heterogêneas, de suínos, no
sequenciamento do gene gdh, e de bovinos e ovinos, no sequenciamento do tpi. Na
análise da genotipagem multilocus (MLG), somente três isolados apresentaram
concordância utilizando-se os três genes, não sendo possível estabelecer relação entre a
assemblage e as variáveis sexo, faixa etária, raça, aptidão e escore fecal.
Abstract
Giardia duodenalis is parasite of small intestine of several mammalian species,
including humans, and it is found worldwide. Among domestics and wild animals this
specie is prevalent regardless of race, sex, age and fitness, with significant clinical and
economic importance. For a long time the parasite was considered specific for the host
where it was found, but recently it was observed the existence of a relationship between
assemblage of isolate and its host. Currently, G. duodenalis have been considered a
complex, and molecular characterization of parasite isolates is critical for the knowledge
about the transmission of giardiasis. Different results have been identified when various
loci are sequenced, therefore, multilocus genotyping becomes the main ally in the
trusted attribution of assemblages/subassemblages to the isolates. The aim of this study
was to genetically characterize G.duodenalis cysts from dogs, cattle, pigs and lambs
from kennels, pet shops, and farms from microregion of Uberlândia, using four
markers. To determine the positivity of G. duodenalis cysts a flotation technique was
employed. For genotyping, the genes glutamate dehydrogenase (gdh), triose phosphate
isomerase (tpi), β-giardin (bg) and SSU-rRNA was used. Cysts of G.duodenalis were
found in dogs, cattle, pigs and lambs and the infection rates were 21,66%, 18,75%,
5.5% e 24,8%, respectively. In association between positivity and sex, age, race and
fitness, only age was significant regarding the infection. Fragments of gdh, tpi and bg
was amplified in 33,3%, 36,8 and 7,2% of samples, respectively. PCR detection of
SSU- rRNA failed to amplify and to sequence DNA samples. A total of 70 sequences
were obtained, 34 (48,6%) from gdh, 25 (35,7%) from tpi and 11 (15,7%) from bg. The
predominace of host-adapted assemblages was observed in all genes, and tpi was the
only gene that classified isolates as zoonotic assemblage. Heterogeneous samples were
found in gdh (pigs) and tpi (cattle and lambs). On multilocus genotyping (MLG) only
three samples demonstrated concordance using the three genes, thus it was not possible
to establish any relationship between assemblage and the variables sex, age, race fitness
and fecal score.
Palavras-chave
Parasitologia, Giardia lamblia, Giardia duodenalis, Isolados, Multilocus, Assemblage, Isolates, Assemblage, Multilocus
Citação
FAVA, Natália de Melo Nasser. Variabilidade genotípica dos isolados de Giardia duodenalis em diferentes espécies de animais. 2013. 85 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2013. DOI https://doi.org/10.14393/ufu.di.2013.59