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metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Identificação molecular dos isolados de Giardia duodenalis em crianças procedentes dos municípios de Araguari e Uberlândia
metadata.dc.creator: Scalia, Luana Araújo Macedo
metadata.dc.contributor.advisor1: Cury, Márcia Cristina
metadata.dc.contributor.referee1: Cunha Junior, Jair Pereira da
metadata.dc.contributor.referee2: Soares, Rodrigo Martins
metadata.dc.description.resumo: Giardia duodenalis é parasito de várias espécies de mamíferos, incluindo humanos, tendo distribuição mundial. Está associado à diarréia e desordens nutricionais, especialmente em crianças. A caracterização molecular do parasito é fundamental para identificar as Assemblages/sub-Assemblages relacionadas à infecção, possibilitando a associação dessas com manifestações clínicas. O objetivo deste estudo foi caracterizar molecularmente as Assemblages/sub-Assemblages de G. duodenalis em crianças de pré-escola, provenientes das cidades de Araguari e Uberlândia, Minas Gerais, Brasil, utilizando quatro genes. Para a pesquisa de cistos foi utilizado a técnica de flutuação em sulfato de zinco a 33%. A caracterização molecular utilizou os genes SSU rRNA, β-giardin (bg), glutamato dehidrogenase (gdh) e triose-fostato isomerase (tpi). Foram realizadas análises de genotipagem multilocus (MLG), e de associação entre manifestações clínicas e Assemblages. A presença de cistos de G.duodenalis foi observada em 45 (19,9%) das 226 amostras fecais de crianças procedentes de creches. A PCR falhou em amplificar e sequenciar amostras para o gene SSU rRNA. Trinta e quatro sequências amplificaram pelo gene tpi, sendo 16 Assemblage A, 14 Assemblage B e quatro amostras mistas A/B. Das 32 sequências obtidas pelo gdh, 14 foram Assemblage A, 16 Assemblage B e duas A/B. Para o bg 19 amostras sequenciaram, sendo nove Assemblage A, cinco B, três Assemblage E e duas mistas, A/E e B/E. A predominância de Assemblages variou de acordo com o gene utilizado. Amostras heterogêneas foram encontradas nos três genes, entre elas amostras mistas inter-Assemblages A/B, A/E, B/E e, intra-Assemblage BIII/BIV. Amostras animal-específica (Assemblage E) foram identificadas pelo gene bg, e não confirmadas pelos outros genes. De 45 amostras positivas para microscopia, 35 foram amplificadas pela nested PCR por algum dos gene. Dessas, 12 amostras tiveram completa concordândia inter-Assemblage entre os três genes. Na classificação da MLG, observou-se duas novas MLGs para Assemblage A e cinco novas MLGs para Assemblage B. Houve associação significante (p=0,0101) para Assemblage e localidade, sendo Assemblage A mais prevalente em Araguari e B, em Uberlândia. Observou-se relação significante (p=0,0454) entre Assemblage B e diarréia. Não houve associação com outras manifestações clínicas, tais como dor abdominal, vômito, perda de peso, flatulência e consistência das fezes. Estes achados comprovam a importância do uso de mais de um gene, pois a sensibilidade e variabilidade genética muda, de acordo com o marcador utilizado. Sequências heterogêneas foram encontradas para os três genes e algumas foram consideradas infecções mistas. A PCR falhou em amplificar amostras positivas pela microscopia óptica. A utilização da MLG foi importante para classificação das amostras Assemblage A, mas pouco efetiva para Assemblage B.
Abstract: Giardia duodenalis is a parasite of several mammalian species, including humans, with a worldwide distribution. It is associated with diarrhea and nutritional disorders, especially in children. Molecular characterization of the parasite is crucial to identify assemblages/sub-assemblages related to infection, and its association with clinical manifestations. The goal was to identify the molecular assemblages/sub-assemblages of G. duodenalis in children from pre-school, from Araguari and Uberlândia, Minas Gerais, Brazil. It was used four genes for this research. The cysts were researched with 33% zinc sulfate flotation. The molecular characterization used SSU rRNA, β-giardin (bg), glutamate dehydrogenase (gdh) and triose phosphate isomerase (tpi) protocols. We conducted a multilocus genotyping (MLG) and the association between clinical manifestations and assemblage. Cysts of G.duodenalis were found in 45 (19.9%) of 226 stool samples from nurseries children. PCR detection (SSU rRNA protocol) failed to amplify DNA samples. Tpi protocol has amplified thirty-four sequences: 16 assemblage A, 14 assemblage B and four mixed samples A/B. Gdh protocol amplified 32 sequences, including 14 assemblage A, 16 assemblage B and two A/B. For bg protocol 19 samples sequenced, nine was characterized as assemblage A, five as assemblage B, three as E, and two mixed, A/E and B/E. The predominance of assemblages varied with the gene protocol used. Heterogeneous samples were found in all genes, including mixed inter-assemblages A/B, A/E, B/E, and intra-assemblage BIII/BIV. Animal-specific (assemblage E) samples were identified with bg, and not confirmed by other genes. From 45 positive samples by optical microscopy, 35 were amplified by nested PCR for at least one gene. Among all, 12 samples were characterized in full concordance by the three genes. It was described two new MLGs assemblages A and five new MLGs to assemblage B. Assemblage A was highly prevalent in Araguari (p = 0.0101) and assemblage B, in Uberlândia. There was a statistically association (p = 0.0454) between assemblage B and diarrhea. There was no association with other clinical manifestations such as abdominal pain, vomiting, weight loss, flatulence and stool consistency. These findings prove the importance of using more than one gene protocol, since the sensitivity and genetic variability changes with the locus used. Heterogeneous sequences were found for all three genes and were considered mixed infections. PCR failed to amplify positive samples by optical microscopy. The use of MLG was important for the classification of assemblage A isolates, but less effective in assemblage B.
Keywords: Giardia duodenalis
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::PARASITOLOGIA
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências Biológicas
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
Citation: SCALIA, Luana Araújo Macedo. Identificação molecular dos isolados de Giardia duodenalis em crianças procedentes dos municípios de Araguari e Uberlândia. 2012. 95 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2012.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/16679
Issue Date: 24-May-2012
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Imunologia e Parasitologia Aplicadas

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