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Document type: Dissertação
Access type: Acesso Aberto
Title: Identificação de peptídeos sintéticos ligantes à imunoglobulinas G de pacientes com neurocisticercose por Phage display
Author: Ribeiro, Vanessa da Silva
First Advisor: Costa-cruz, Julia Maria
First member of the Committee: Vieira, Carlos Ueira
Second member of the Committee: Oliveira, Heliana Batista de
Summary: A neurocisticercose (NC), resultado da presença dos metacestódeos de T. solium no sistema nervoso central constitui a forma mais grave da cisticercose, sendo a principal causa de epilepsia nos países em desenvolvimento. O aprimoramento de testes imunodiagnósticos que utilizem antígenos recombinantes se faz necessário diante da dificuldade de obtenção de suínos naturalmente infectados com metacestódeos de T. solium, para a produção de antígeno. O objetivo deste estudo foi identificar peptídeos recombinantes ligantes à imunoglobulinas G de pacientes com neurocisticercose por phage display, a partir de uma biblioteca randômica de peptídeos e verificar a imunorreatividade dos fagos selecionados pelo método imunoenzimático ELISA. Uma biblioteca de peptídeos randômicos expressados em bacteriófagos filamentosos foi utilizada numa estratégia de seleção contra as imunoglobulinas (IgG) purificadas de soro de pacientes positivos para NC, outras parasitoses e aparentemente saudáveis. As seqüências do DNA correspondente aos insertos dos fagos selecionados foram seqüenciados, traduzidos e analisados por bioinformática. Foram realizados testes de ELISA com os dez fagos selecionados contra os três grupos de pacientes (NC, outras parasitoses e saudáveis). A especificidade de ligação dos fagos ao pool de soros foi analisado por ELISA de competição. Os peptídeos apresentaram similaridades significativas com proteínas importantes do parasito T. solium. Todos os clones apresentaram eficiência de diagnóstico satisfatórias no teste ELISA variando de 90 a 95%. Alguns clones não apresentaram reatividade com o soro de pacientes infectados com Echinococcus granulosus, o que representa um grande avanço uma vez que esta reatividade cruzada é muito freqüente. Os dados de reconhecimento no teste de competição indicaram que os peptídeos selecionados podem mimetizar epítopos de T. solium e se ligar especificamente ao pool de soro de pacientes com NC. Conclui-se que os fagos identificados apresentaram peptídeos específicos para NC e são potenciais biomarcadores no diagnóstico da doença em amostras de soro.
Abstract: Neurocysticercosis (NC), presence of Taenia solium metacestodes in the central nervous system is the most serious form of cysticercosis and is the cause of epilepsy in countries under development. The improvement of immunodiagnostic tests which use recombinant antigens is importance because of the difficulty of obtaining parasites from naturally infected pigs for the preparation of metacestodes T. solium metacestodes crude antigen. The aim of this study was to select phagotopes by phage display peptide library specific to IgG present in serum samples from patients with NC and confirm the immunoreactivity from the selected phagetopes in the ELISA test for the diagnosis of human neurocysticercosis in serum samples. We used in the selection procedure a phage display peptide library in a selection strategy against the immunoglobulins (IgG) purified from serum samples positively diagnosed for NC, other parasitoses and apparently health individuals. The DNA sequences corresponding to the inserts of the selected phage clones were sequenced, translated and analyzed by bioinformatics. ELISA tests were performed with the ten phagetopes selected against the three groups of patients (NC, other parasitoses and healthy). The binding specificities of the recombinant phages to the pool of serum samples were analyzed by competitive ELISA. Peptides showed significant similarities with important proteins from T. solium. All phagetopes presented satisfactory sensitivities and specificities in the ELISA test, varying from 52.5% to 100% and 86.3% to 100%, respectively. Some phagetopes did not reacted with serum samples from patients infected with Echinococcus granulosus, what is an advance since this cross reaction is very commonly reported. The recognition data indicated that the selected peptides could indeed mimic the epitopes on T. solium and bind specifically to the pool of serum with NC. We concluded that the identified phage clones displayed specific peptides to NC, and are potential biomarkers for NC diagnosis in serum samples.
Keywords: Taenia solium
Cisticercose cerebrospinal
Teste imunoenzimático
Imunodiagnóstico
Neurocisticercose
ELISA
Peptídeos
Neurocysticercosis
Phage display, Peptides
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA
Language: por
Country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Institution Acronym: UFU
Department: Ciências Biológicas
Program: Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
Quote: RIBEIRO, Vanessa da Silva. Identificação de peptídeos sintéticos ligantes à imunoglobulinas G de pacientes com neurocisticercose por Phage display. 2009. 84 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2009.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/16631
Date of defense: 6-Feb-2009
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Imunologia e Parasitologia Aplicadas

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