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Tipo do documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso Aberto
Título: Imunização de camundongos com antígenos de lisado total (NLA) e de excreção-secreção (NcESA) de Neospora caninum associados com oligodeoxinucleotídeo CpG como adjuvante
Autor(es): Ribeiro, Dâmaso Pacheco
Primeiro orientador: Silva, Deise Aparecida de Oliveira
Primeiro coorientador: Mineo, Jose Roberto
Primeiro membro da banca: Silva, Neide Maria da
Segundo membro da banca: Mineo, Tiago Wilson Patriarca
Resumo: Neospora caninum é um protozoário do filo Apicomplexa que causa doenças neuromusculares em cães e abortos em bovinos, acarretando significativas perdas econômicas. Estudos em modelos murinos têm contribuído para caracterizar novos antígenos e estratégias para procedimentos de vacinação. Oligodeoxinucleotídeos (ODN) com seqüências CpG são considerados potentes imunoadjuvantes para vários patógenos, mas há limitada informação sobre sua utilização em vacinação contra neosporose. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial de antígenos de lisado total (NLA) e de excreção-secreção (NcESA) de N. caninum combinados com ODN-CpG na indução de resposta imune e proteção contra infecção por N. caninum em camundongos. Seis grupos de camundongos C57BL6 foram imunizados subcutaneamente com NLA, NLA+CpG, NcESA, NcESA+CpG, CpG (controle do adjuvante) ou PBS (controle da infecção), com três reforços em intervalos de 2 semanas. Análises sorológicas mostraram aumento na resposta de IgG2a anti-N. caninum em grupos de animais imunizados com qualquer antígeno combinado com adjuvante CpG e níveis elevados do isotipo IgG1 naqueles grupos contendo somente antígenos. Respostas proliferativas após estimulação antigênica in vitro foram mais elevadas nos grupos imunizados com antígenos associados com CpG, com alta produção de IL-12, mas camundongos imunizados com NcESA ou NcESA+CpG exibiram maiores níveis de IFN-g e elevada razão IFN-g/IL-10. Após desafio com 2 x 107 taquizoítas de N. caninum, camundongos vacinados com NLA+CpG ou NLA apresentaram os mais baixos escores de morbidade e alterações de peso corporal em comparação aos outros grupos, e nenhum animal sucumbiu à infecção. Em contraste, camundongos vacinados com NcESA+CpG ou NcESA exibiram os mais altos escores de morbidade, alterações de peso corporal e taxas de mortalidade após desafio, associado com a maior carga parasitária cerebral determinada por PCR e imunohistoquímica. Pode-se concluir que ODN-CpG foi capaz de induzir elevada resposta imune humoral e celular do tipo Th1 pela produção de maiores níveis de IgG2a que IgG1 para qualquer antígeno, NLA ou NcESA, e uma forte resposta imune celular associada com altos níveis de IFN-g foi relacionada mais ao antígeno NcESA do que ao adjuvante utilizado. Vacinação com NLA+CpG ou NLA resultou em total proteção dos camundongos enquanto NcESA+CpG ou NcESA induziram maior susceptibilidade dos animais após desafio com N. caninum.
Abstract: Neospora caninum is an apicomplexan parasite that causes neuromuscular diseases in dogs and abortion in cattle worldwide, leading to significant economic losses. Studies using murine models have contributed to characterize novel antigens and strategies for successful protocols of vaccination. CpG oligodeoxynucleotides (ODN) have shown to be potent immunoadjuvants for several pathogens, but there is limited information concerning its utilization in vaccination for neosporosis. This study aimed to evaluate the potential of Neospora lysate antigen (NLA) or excreted-secreted antigen (NcESA) combined with CpG-ODN in inducing enhanced immune response and protection against N. caninum infection in mice. Six groups of C57BL6 mice were vaccinated subcutaneously three times at 2-week intervals with NLA, NLA+CpG, NcESA, NcESA+CpG, CpG (adjuvant control) or PBS (infection control). Serological assays showed an increased IgG2a response in groups of animals immunized with either antigen plus adjuvant and elevated levels of the IgG1 isotype in those presenting antigen preparations alone. Splenocyte proliferative responses upon antigen stimulation in vitro were higher in groups immunized with either antigen plus CpG, with increased IL-12 production, but mice immunized with NcESA or NcESA+CpG exhibited higher IFN-g levels and IFN-g/IL-10 ratio. After a month of the 3rd booster and challenge with 2 x 107 N. caninum tachyzoites, mice vaccinated with NLA+CpG or NLA alone had lower morbidity score and body weight changes in comparison to other groups, and no animal succumbed to infection. In contrast, mice vaccinated with NcESA+CpG or NcESA exhibited the highest morbidity scores, body weight changes and mortality rates after challenge, associated with a greater brain parasite burden determined by PCR and immunohistochemistry. In conclusion, CpG-ODN was able to induce an increased Th1- type immune response as determined by higher levels of IgG2a than IgG1 for either antigen, NLA or NcESA, and a strong cellular immune response associated with high levels of IFN-g was related to the NcESA antigen rather than the adjuvant used. Also, vaccination with NLA+CpG or NLA alone resulted in total protection of mice, while NcESA alone or combined with CpG became mice more susceptible to parasite challenge.
Palavras-chave: Neospora caninum
ODN-CpG
Adjuvante
Vacinação
CpG-ODN
Adjuvant
Vaccination
Doenças parasitárias
Área(s) do CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA
Idioma: por
País: BR
Editora: Universidade Federal de Uberlândia
Sigla da instituição: UFU
Departamento: Ciências Biológicas
Programa: Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
Referência: RIBEIRO, Dâmaso Pacheco. Imunização de camundongos com antígenos de lisado total (NLA) e de excreção-secreção (NcESA) de Neospora caninum associados com oligodeoxinucleotídeo CpG como adjuvante. 2008. 75 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2008.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/16630
Data de defesa: 29-Ago-2008
Aparece nas coleções:DISSERTAÇÃO - Imunologia e Parasitologia Aplicadas

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