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https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/16564| Document type: | Tese |
| Access type: | Acesso Aberto |
| Title: | Determinação da reatividade diferencial de anticorpos de bovinos vacinados com a cepa S19 de Brucella abortus e naturalmente infectados através de análises imunoproteômicas |
| Author: | Pajuaba, Ana Cláudia Arantes Marquez |
| First Advisor: | Mineo, José Roberto |
| First coorientator: | Silva, Deise Aparecida de Oliveira |
| First member of the Committee: | Beletti, Marcelo Emílio |
| Second member of the Committee: | Cunha Junior, Jair Pereira da |
| Third member of the Committee: | Pranchevivius, Maria Cristina da S. |
| Fourth member of the Committee: | Fontana, Renato |
| Summary: | O objetivo deste estudo foi caracterizar uma nova preparação antigênica de Brucella abortus obtida pela extração com o detergente Triton X-114 (TX-114) por análise imunoproteômica e immunoblot-avidez, utilizando os conjugados de detecção anti-IgG bovina e Proteína A, marcados com peroxidase. Amostras de soros de três grupos de bovinos foram analisadas: (GI) 30 vacas soropositivas não-vacinadas; (GII) 30 novilhas soropositivas e vacinadas com B. abortus S-19; (GIII) 30 vacas soronegativas não-vacinadas. Os perfis eletroforéticos unidimensionais (1-D) e bidimensionais (2-D) do antígeno TX-114 revelaram amplo espectro de polipeptídeos (10 a 79 kDa), e immunoblot 1-D mostrou um extenso perfil de reatividade por soros de GI comparado a um perfil mais restrito por soros de GII, independente dos conjugados de detecção utilizados. Anticorpos IgG de alta avidez foram detectados em soros de GI por ambos os conjugados analisados, mas Proteína A/peroxidase mostrou maior capacidade de detectar anticorpos IgG2 de baixa avidez em soros de GII. Cinco componentes antigênicos imunodominantes (24, 28, 35, 47 e 52 kDa) foram predominantemente reconhecidos por anticorpos IgG de alta avidez em GI, em adição a três componentes antigênicos não imunodominantes reconhecidos exclusivamente por soros deste grupo (10, 12 e 17 kDa), sendo considerados como potenciais marcadores de infecção e exclusão de resposta vacinal. A caracterização proteômica revelou 42 spots no gel 2-D e permitiu a identificação de 22 proteínas citoplasmáticas hipotéticas, enquanto o immunoblot 2-D demonstrou sororeatividade de polipeptídeos abaixo de 20 kDa exclusivamente com soros de GI. A análise por espectrometria de massa destes polipeptídeos permitiu a identificação de cinco proteínas antigênicas de B. abortus (Bfr, Dps/Ndpk-I, Sod e Proteína B de invasão), das quais Ndpk-I e proteína B de invasão foram identificadas em cepa vacinal de B. abortus S-19 pela primeira vez no presente estudo, e relacionadas com a antigenicidade em amostras soropositivas de bovinos não vacinados. Em conclusão, a análise imunoproteômica deste novo antígeno solúvel de B. abortus permitiu a caracterização de várias proteínas antigênicas da cepa S-19 que podem ser candidatas ao sorodiagnóstico da brucelose bovina e diferenciação entre animais vacinados e infectados. A avaliação da avidez de anticorpos IgG2 específicos a marcadores antigênicos do antígeno TX-114 pode ser também considerada como ferramenta adicional para permitir melhor distinção sorológica no perfil de afinidade funcional de anticorpos IgG em resposta à infecção e vacinação na brucelose bovina. |
| Abstract: | The aim of this study was to characterize a new soluble antigen of Brucella abortus obtained by Triton X-114 (TX-114) extraction by immunoproteomic analysis and immunoblot-avidity, using the detection conjugates anti-bovine IgG and Protein A labeled with peroxidase. Serum samples of three groups of bovine were studied: (GI) 30 nonvaccinated seropositive cows; (GII) 30 S19-vaccinated seropositive heifers; (GIII) 30 nonvaccinated seronegative cows. The one dimensional (1-D) and two dimensional (2-D) electrophoretic profiles of the TX-114 antigen revealed a broad spectrum of polypeptides (10 to 79 kDa), and 1-D immunoblot showed a widespread profile of reactivity by sera of GI compared with a more restricted profile by sera of GII, regardless of the detection conjugate. High avidity IgG antibodies were detected in sera of GI by both conjugates analyzed, but Protein A/peroxidase showed higher ability to detect low avidity IgG2 antibodies in sera of GII. Five major antigenic components (24, 28, 35, 47 and 50 kDa) were predominantly recognized by high avidity IgG antibodies in sera of GI, in addition to three minor antigenic components (10, 12 and 17 kDa) that were recognized exclusively by sera of this group, and so considered potential markers of infection and exclusion of vaccinal response. The proteomic characterization revealed 42 spots in 2-D gel, being possible to identify 22 hypothetical cytoplasmic proteins, while the 2-D immunoblot showed reactivity of polypeptides below 20 kDa exclusively with sera of GI. The analysis by mass spectrometry of these polypeptides was able to identify five antigenic proteins of B. abortus (Bfr, Dps/Ndpk-I, Sod, and Protein B of invasion), from which Ndpk-I and Protein B of invasion were identified in vaccinal S19 strain on the first time in the present study, and were related with the antigenicity in seropositive samples of non-vaccinated bovine. In conclusion, the immunoproteomic analysis of this new soluble antigen of B. abortus permitted the characterization of several antigenic proteins of the vaccinal S19-strain that could be candidates for the serodiagnosis of bovine brucellosis and the differentiation between vaccinated and infected animals. The evaluation of avidity of IgG2 antibodies to antigenic markers of the TX-114 antigen can also be considered an additional tool for a better serological distinction in the profile of functional affinity of IgG antibodies in response to infection and vaccination in bovine brucellosis. |
| Keywords: | Brucella abortus Imunoproteômica Eletroforese 2-D Immunoblotavidez Triton X-114 Bovinos Immunoproteomic 2-D electrophoresis Immunoblot-avidity Triton X-114 Bovine Brucelose em bovino - Diagnóstico |
| Area (s) of CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA |
| Language: | por |
| Country: | BR |
| Publisher: | Universidade Federal de Uberlândia |
| Institution Acronym: | UFU |
| Department: | Ciências Biológicas |
| Program: | Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas |
| Quote: | PAJUABA, Ana Cláudia Arantes Marquez. Determinação da reatividade diferencial de anticorpos de bovinos vacinados com a cepa S19 de Brucella abortus e naturalmente infectados através de análises imunoproteômicas. 2010. 90 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2010. |
| URI: | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/16564 |
| Date of defense: | 8-Sep-2010 |
| Appears in Collections: | TESE - Imunologia e Parasitologia Aplicadas |
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