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metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Mapeamento de epitopos funcionais do receptor CD14 por Phage Display e o reconhecimento de componentes bacterianos
metadata.dc.creator: Alves, Patrícia Terra
metadata.dc.contributor.advisor1: Goulart Filho, Luiz Ricardo
metadata.dc.contributor.referee1: Mineo, Tiago Wilson Patriarca
metadata.dc.contributor.referee2: Vieira, Gustavo Fioravanti
metadata.dc.description.resumo: O antígeno de diferenciação 14 é uma molécula chave da imunidade inata. É um receptor de reconhecimento padrão que reconhece principalmente lipopolissacarídeo (LPS), ácido lipoteicóico e ácido araquidônico, após este reconhecimento a indução da liberação de diversas citocinas como um mecanismo de defesa do sistema imunológico. Diversos estudos sugerem diferentes epítopos da região N-Terminal da molécula como sítios de reconhecimento ao LPS, no entanto, resultados contraditórios sobre a sequência de reconhecimento ainda persistem. Neste trabalho, epítopos funcionais da molécula CD14 foram mapeadas através da técnica de Phage Display utilizando anticorpos anti-CD14 comerciais e uma biblioteca de peptídeos Ph.D-C7C expressa na superfície de fagos filamentosos M13. Análises in silico e funcionais foram realizadas para mapear os peptídeos selecionados na estrutura 3D do CD14 e verificar a imunoreatividade dos peptídeos contra componentes bacterianos (bactéria gram-positivas e gram-negativas). Os peptídeos selecionados reagiram fortemente contra diferentes bactérias, além do o reconhecimento da região amino terminal do CD14, foi demonstrado uma segunda região no meio do receptor com a capacidade de ligação a componentes bacterianos. Adicional análise in silico sugeriram um possível papel dos epítopos do CD14 como peptídeos antimicrobianos naturais.
Abstract: The cluster of differentiation antigen 14 (CD14) is a key molecule of the innate immunity. This pattern recognition receptor binds mainly to lipopolysaccharide (LPS), lipotechoic acid, arachidonic acid and thus induces the releases various cytokines as a defense mechanism. Several studies suggest that different regions of the amino-terminal portion of the molecule may be involved in the LPS binding; however, controversial results on the recognition sequence still persist. In this work, functional epitopes of the CD14 molecule were mapped through Phage Display by using a 7-mer conformational constrained random peptide library against a monoclonal antibody anti-soluble CD14-fraction ST and a polyclonal anti-CD14. In silico and empirical analyzes were performed to map the selected peptides into the CD14 3D structure. Immunoreactivity tests of peptides against bacterial components of Gram+ and Gram- bacteria were performed in order to demonstrate their functional recognition. All peptides strongly reacted against all bacteria, and besides the recongtion of the amino-terminal region, we were able to demonstrate a second epitope site in the middle of the receptor. Additional in silico analysis suggests a possible role of CD14 epitopes as natural antimicrobial peptides.
Keywords: CD14
Mapeamento de epítopos
Receptor de LPS
Phage display
Epitope mapping
LPS receptor
Epítopos
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências Biológicas
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
Citation: ALVES, Patrícia Terra. Mapeamento de epitopos funcionais do receptor CD14 por Phage Display e o reconhecimento de componentes bacterianos. 2013. 68 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2013.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15869
Issue Date: 29-Jul-2013
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Genética e Bioquímica

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