Please use this identifier to cite or link to this item: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15854
metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Expressão heteróloga de abaecina de Apis mellifera em Pichia pastoris
metadata.dc.creator: Luiz, Denis Prudêncio
metadata.dc.contributor.advisor1: Vieira, Carlos Ueira
metadata.dc.contributor.referee1: Bonetti, Ana Maria
metadata.dc.contributor.referee2: Machado, Luiz Fernando Almeida
metadata.dc.description.resumo: CAPITULO 2: Peptídeos antimicrobianos (AMPs) fazem parte da defesa imune que os insetos apresentam para proteção contra patógenos. Nesse trabalho foi feito a expressão do peptídeo antimicrobiano abaecina do himenóptero Apis mellifera em levedura Pichia pastoris. Foi desenhado um gene contendo elementos para clonagem, purificação e término de tradução baseado na sequência de abaecina de Apis mellifera seguido de otimização de códons e posterior síntese química do gene. Esse gene foi clonado em pUC57 e após sequenciamento para confirmação, o inserto foi subclonado em vetor de expressão pPIC9 e transformado em Pichia pastoris. Após seleção de clones positivos, a expressão foi induzida por adição de metanol. O sobrenadante foi analisado em diferentes tempos para determinação do tempo ótimo de produção do peptídeo recombinante. A análise da atividade inibitória de crescimento mostrou que houve inibição significativa do crescimento da bactéria Escherichia coli no tempo de 24 hora nas concentrações de 10 e 25 μg de peptídeo. Os resultados mostram que o peptídeo abaecina de Apis mellifera produzido em Pichia pastoris tem atividade antimicrobiana.
Abstract: CHAPTER 2: Antimicrobial peptides (AMPs) are part of the immune defense that insects have developed to protection hymnoptera against pathogens. This work was done the expression of antimicrobial peptide Abaecina of Apis mellifera in fungi Pichia pastoris. A gene containing elements for cloning, purification and termination of translation was designed based on the sequence of Apis mellifera abaecina then was optimization of codons and subsequent chemical synthesis of the gene. This gene was cloned into pUC57 and after sequencement for confirmation, then the insert was subcloned into expression vector pPIC9 and realized the transformation into Pichia pastoris. After selection of positive clones expression was induced by adding methanol. The supernatant was analyzed at different times to determine the optimum time of production of the recombinant peptide. The growth inhibition test showed that there was significant inhibition of growth of the bacterium Escherichia coli DH5α in time of 24 hours at concentrations of 10 and 25 mg of peptide. The results showed that the peptide abaecina of Apis mellifera produced in Pichia pastoris has antimicrobial activity.
Keywords: Abaecina
Pichia pastoris
Apis mellifera
Expressão heteróloga
Abaecin
Heterologous expression
Abelha - Genética
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências Biológicas
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
Citation: LUIZ, Denis Prudêncio. Expressão heteróloga de abaecina de Apis mellifera em Pichia pastoris. 2011. 41 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2011.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15854
Issue Date: 27-Jul-2011
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Genética e Bioquímica

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
diss denis.pdf875.54 kBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.