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metadata.dc.type: Dissertação
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Title: Identificação de atividades ATPásica e Amilásica em larvas de Pachymerus nucleorum (Fabricius, 1792) (Coleoptera: Chrysomelidae: Bruchinae)
metadata.dc.creator: Lacerda, Rogério de Freitas
metadata.dc.contributor.advisor1: Coelho, Milton Vieira
metadata.dc.contributor.referee1: Cameron, Luiz Claudio
metadata.dc.contributor.referee2: Sales, Mauricio Pereira de
metadata.dc.description.resumo: RESUMO GERAL - Atividades enzimáticas do tipo ATPásica e Amilásica foram detectadas em larvas do coleóptero Pachymerus nucleorum (Fabricius, 1792), uma espécie de besouro incluída na sub-família Bruchinae, da família Chrysomelidae e praga do coco babaçu (Orbinya spp). A atividade ATPásica foi isolada por fracionamento com sulfato de amônio, de extratos do corpo gorduroso e atividade amilásica foi extraída por solubilidade em tampão de intestino das larvas. Essas atividades foram parcialmente caracterizadas por SDS-PAGE, zimograma, e por parâmetros cinéticos como temperatura, efeitos de íons metálicos, efeitos de ativadores. Os resultados mostraram uma atividade ATPásica mais ativa na presença de íons Mg2+ e Co2+. Observou-se maior atividade na presença de ATP e leve inibição por vanadato. A atividade amilásica foi levemente ativada por sacarose, apresentou temperatura ótima a 50ºC e foi ativada em torno de 20% por íons cálcio e por NaCl a concentrações 0,5 e 14 mM, respectivamente. As atividades caracterizadas podem ser importantes para determinar estratégias para o controle dessa praga do coco da palmeira do babaçu. RESUMO - CAPÍTULO I - Pachymerus nucleorum (Fabricius, 1792) é uma espécie de coleóptero da sub-família Bruchinae, família Chrysomelidae, que possui como principal hospedeiro a palmeira babaçu (Orbinya spp). O objetivo deste trabalho foi identificar e caracterizar atividade ATPásica em larvas de P. nucleorum. O aparelho digestivo das larvas de P. nucleorum foi retirado e o corpo gorduroso foi homogeneizado, imediatamente, em tampão imidazol 50 mM pH 7,5 contendo inibidores de protease (Aprotinina 0,2 µg/mL e Benzamidina 1 mM), sacarore 250 mM e EDTA 1 mM e centrifugado a 15000xg por 30 minutos a 4 ºC. A fração S1 foi fracionada com sulfato de amônio a 20 % de saturação. A fração precipitada (P2) foi ressuspendida em tampão Imidazol pH 8,0 contendo EDTA 1 mM e β- mercaptoetanol 0.2 mM e centrifugado. A fração P3 foi tratada com ATP 10 mM e MgCl2 5 mM, e centrifugada. A fração P4 apresentou atividades Mg-ATPásica e Co-ATPásica e os principais polipeptídios desta fração possuem Mr em torno de 180, 54, 43 e 17 kDa. Cálcio ou cálcio/calmodulina não estimularam a atividade Mg-ATPásica, e não foi detectado atividade K-EDTA-ATPásica. A atividade Mg- ATPásica não foi estimulada por outros cátions e foi levemente inibida por vanadato. A atividade Mg-GTPásica foi cerca de 50% da atividade Mg-ATPásica. RESUMO - CAPÍTULO II - Pachymerus nucleorum (Fabricius, 1792) é uma espécie de besouro da sub-família Bruchinae, família Chrysomelidae e cujo principal hospedeiro são cocos da palmeira babaçu (Orbinya spp), planta típica de zonas de várzeas e vales de rios. O objetivo desse trabalho foi identificar e caracterizar atividade amilásica no intestino de larva de P. nucleorum. Foram retirados o intestino de larvas de P. nucleorum, homogeneizados imediatamente em tampão fosfato 50 mM pH 7,5 contendo inibidores de protease (Aprotinina 0,2 µg/mL e Benzamidina 1 mM) e sacarore 250 mM e EDTA 1 mM. A fração solúvel S1 apresentou maior atividade amilásica em relação à fração precipitada P1 e análise em SDS-PAGE mostrou polipeptídios em torno de 62 kDa e entre 12 a 40 kDa nessa fração. A fração S1 apresentou máxima atividade amilásica a 50 ºC. Na presença de cálcio 0,5 mm ou cloreto de sódio 14 mM, a atividade amilásica foi ativada, respectivamente, em 20 e 45 %. A preparação com sacarose e EDTA apresentou maior atividade amilásica em relação à preparação sem sacarose e EDTA. Em ambas as preparações, observou-se um aumento de atividade quanto armazenada em geladeira, um maior aumento na preparação sem sacarose e EDTA.
Abstract: ABSTRACT - CHAPTER I - Pachymerus nucleorum (Fabricius, 1792) is a beetle specie of the Bruchinae sub-family, family Chysomelidae, that principal host of this insect is a palm babassu (Orbinya spp). The objective of this work was identify and to characterize the ATPase activity in P. Nucleorum larvae. The P. nucleorum larvae guts were discartated and the greasy body was homogenized in 50 mM phosphate buffer, pH 7,5 containing protease inhibitor (0,2 ug/mL Aprotinine, 1 mM Benzamidine, 250 mM sucrose and 1 mM EDTA), after that the samples were centrifugated at 15000xg for 30 minutes, 4 º C. Amonium sulfate was added to the supernatant fraction (S1) and centrifugated at 45000xg for 30 minutes, 4 º C. The precipitated fraction (P2) was ressuspended in Imidazol buffer, pH 8,0 containing 1 mM EDTA and 0,2 mM β-mercaptoetanol and centrifugated at 45000xg for 30 minutes, 4 º C. Final concentrations of 10 mM ATP and 5 mM MgCl2 was added to the P3 fraction and centrifugated. The fraction P4 presented Mg-ATPase e Co- ATPase activity and main polipeptides with 180, 54, 43 and 17 kDa. The Mg- ATPase activity was not estimulated by calcium or calcium/calmoduline, and KEDTA ATPase activity was absent. The Mg-ATPase was not estimulated by other cátions and was slightly inhibited by vanadate. The Mg-GTPase activity was about 50% of Mg-ATPase activity. ABSTRACT - CHAPTER II - Pachymerus nucleorum (Fabricius, 1792) is a beetle specie of the Bruchinae sub-family, family Chysomelidae and principal host is coconut of the palm babassu (Orbinya spp), typical of the varzea zones and river valleys. The objective in this work was identify and to characterize the amylolytic activity in P. nucleorum larvae guts. The guts were immediately homogenized in phosphatate buffer 50 mM pH 7,5 containing protease inhibitor (Aprotinine 0,2 ug/mL and Benzamidine 1 mM), sucrose 250 mM and EDTA 1 mM, after that the samples were centrifugated at 15000xg for 30 minutes, 4 º C. The supernatant fraction (S1) presented higher amylolytic activity in relation to the precipitated fraction (P1). Analyses in SDS-PAGE revealed polipeptides of 62 kDa, in fraction P1 and in fraction S1 polipetides of 12 and 40 kDa. The fraction S1 presented maximum amylolytic activity in 50°C, and estimulation of the activity in 20% and 45% in presence of calcium 0,5 mM or sodium chloride 14 mM, respectively. The preparation containing sucrose and EDTA presented higher amylolytic activity in relation to the preparation without sucrose and EDTA. An increase in the amylolytic activity was observed in both preparations when stored in refrigerator, however the preparation without sucrose and EDTA presented higher increase in this activity.
Keywords: Pachymerus nucleorum
Larva
Amilase
ATPase
Babaçu
Bruquídeo
Atividade
ATPásica
Amilásica
Babassu
Bruchid
Activity
Amylase
Proteínas
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
metadata.dc.publisher.initials: UFU
metadata.dc.publisher.department: Ciências Biológicas
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
Citation: LACERDA, Rogério de Freitas. Identificação de atividades ATPásica e Amilásica em larvas de Pachymerus nucleorum (Fabricius, 1792) (Coleoptera: Chrysomelidae: Bruchinae). 2006. 92 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2006.
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15840
Issue Date: 28-Feb-2006
Appears in Collections:DISSERTAÇÃO - Genética e Bioquímica

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