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https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15821
Document type: | Dissertação |
Access type: | Acesso Aberto |
Title: | Purificação e caracterização bioquímica da moozincina, uma metaloprotease dependente de zinco presente na peçonha da serpente Bothrops moojeni (Caiçaca) |
Alternate title (s): | Purification and functional characterization of a new non-hemorrhagic metalloprotease from Bothrops moojeni snake venom |
Author: | Fonseca, Kelly Cortes |
First Advisor: | Silva, Nilson Penha |
First coorientator: | Oliveira, Fábio de |
First member of the Committee: | Ávila, Veridiana de Melo Rodrigues |
Second member of the Committee: | Soares, Andreimar Martins |
Summary: | As peçonhas de serpentes do gênero Bothrops contêm proteases que contribuem com efeitos locais vistos no envenenamento. Neste estudo, uma metaloprotease não hemorrágica foi isolada da peçonha de B.moojeni. Esta enzima foi isolada por uma combinação de cromatografia de troca iônica e exclusão molecular e nomeada moozincina. A enzima teve seu grau de pureza avaliado em SDS PAGE corado com azul brilhante de Comassie e mostrou uma massa molecular aparente de 30 kDA. A moozincina não induz hemorragia, atividade coagulante, desfibrinação ou atividade fosfolipásica, mas mostrou atividade proteolítica sobre fibrinogênio bovino. A moozincina degrada inicialmente a cadeia Aα do fibrinogênio, em seguida a cadeia Bβ e não mostra efeitos sobre a cadeia γ. A atividade da moozincina foi inibida após incubação com agentes quelantes (EDTA, 1,10 fenantrolina) e agente redutor β- mercaptoetanol) indicando ser uma protease dependente de íon metálico. Em contrapartida, a aprotinina e a benzamidina não afetaram sua atividade. A moozincina se apresentou ativa em pH 7.0 a 11, sendo estável em solução até 50 ºC. Sua atividade fibrinogenolítica foi completamente perdida em temperatura igual ou superior a 60 °C. Observações histológicas mostraram que a administração intramuscular de moozincina induziu baixa mionecrose, evidenciada por degeneração hialina e infiltração leucocitária. Moozincina induziu alterações celulares nos pulmões, mas não alterou fígado, rins e células cardíacas. |
Abstract: | Bothrops snake venoms contain proteases that contribute to the local effects seen after envenoming. In this study, a non-hemorrhagic metalloprotease was isolated from the venom of B. moojeni. The enzyme was isolated by a combination of ion exchange and gel filtration chromatographies and named Moozincin. The enzyme was purified to homogeneity as judged by its migration profile in SDS PAGE stained with coomassie blue, and showed a molecular mass of about 30 kDa. Moozincin did not induce hemorrhage, blood clotting, defibrinating or phospholipase A2 activities, but displayed proteolytic activity on bovine fibrinogen. Moozincin cleaves the Aα-chain of fibrinogen first, followed by the Bβ-chain, and shows no effects on the γ-chain. The fibrinogenolytic activity of Moozincin was abolished after incubation with a chelating agent (EDTA, 1,10-phenantroline) β-mercaptoethanol, indicating that it is metal iondependent. In contrast, aprotinin and benzamidine did not affect these activities. Moozincin was active at pH 7 - 11 and was stable in solution at up to 50 °C; fibrinogenolytic activity was completely lost at ≥60 °C. Histological observations showed that Moozincin induces low myonecrosis upon intramuscular injection in mice evidenced by hyaline degeneration and leukocyte infiltrate. Moozincin induced cell alterations in lung, but not alter liver, kidney and heart cells. |
Keywords: | Bothrops moojeni Veneno de serpente Fibrinogenase Metaloprotease Snake venom Metalloprotease Cobra venenosa - Veneno Bothrops |
Area (s) of CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA |
Language: | por |
Country: | BR |
Publisher: | Universidade Federal de Uberlândia |
Institution Acronym: | UFU |
Department: | Ciências Biológicas |
Program: | Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica |
Quote: | FONSECA, Kelly Cortes. Purification and functional characterization of a new non-hemorrhagic metalloprotease from Bothrops moojeni snake venom. 2010. 52 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2010. |
URI: | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15821 |
Date of defense: | 20-Jul-2010 |
Appears in Collections: | DISSERTAÇÃO - Genética e Bioquímica |
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